TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli

TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent <i>E. coli</i>

Citations et références (1)

Invitrogen™

TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli

Les kits TOPO™ TA Cloning™ sont conçus pour le clonage de produits PCR directement à partir d’une réaction PCR enAfficher plus

Référence	Quantité
K461020	25 réactions

Référence K461020

Prix (EUR)

651,65

Offre exceptionnelle en ligne

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Quantité:

25 réactions

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Les kits TOPO™ TA Cloning™ sont conçus pour le clonage de produits PCR directement à partir d’une réaction PCR en seulement cinq minutes (1). Ils utilisent un vecteur PCR™-TOPO™ avec la topoisomérase I liée par covalence pour le clonage rapide et les recombinants. Les vecteurs PCR™-TOPO™ comprennent :

• des saillies 3´-T pour la ligature directe des produits PCR amplifiés Taq
• Choix de promoteurs T7 (pCR™ 2.1-TOPO™) ou T7 et SP6 (pCR™ II-TOPO™) pour la transcription et le séquençage d’ARN in vitro. Chaque vecteur contient également des sites d’amorce sens et antisens M13 pour le séquençage.
• Des sites EcoR I flanquant le site d’insertion du produit PCR pour une excision facile des inserts
• Des gènes de résistance à la kanamycine et à l’ampicilline permettant de choisir la méthode de sélection dans E. coli
• Sélection de colonies bleues/blanches pour la sélection des recombinants

Les kits TOPO™ TA Cloning™ sont également disponibles dans deskits combinés avec un kit de minipréparation Purelink™ Quick Plasmid (50 préparations) pour la purification rapide des plasmides de vos inserts clonés TOPO™ pour l’analyse en aval.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Souche bactérienne ou de levuresMach1™

Type de celluleChimiquement compétent

Méthode de clonageTOPO™-TA

À utiliser avec (application)Biologie de la chromatine

Gamme de produitsOne Shot

Type de produitKit de clonage

AccélérateurT7, SP6

Quantité25 réactions

VecteurVecteurs de clonage TOPO-TA

FormatKit

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Boîte 1 :
• Vecteur pCRII-TOPO™ activé par topoisomérase I
•Tampon PCR
• Solution saline
• dNTPs
• Modèle de contrôle
• Amorces directes et inverses M13
• Amorces pour PCR de contrôle
• Eau stérile

Stockez entre -5 et -30°C.
Tous les réactifs sont stables pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement stockés.

Encadré 2 :
• Cellules d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™ ou Electrocomp™
• Milieu S.O.C.
• Plasmide de contrôle pUC19 superenroulé.

Stockez entre -68 et -85°C.

Foire aux questions (FAQ)

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

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Citations et références (1)

Citations et références

Abstract

Virus-specific cytotoxic T-lymphocyte responses select for amino-acid variation in simian immunodeficiency virus Env and Nef.

Authors:Evans DT, O'Connor DH, Jing P, Dzuris JL, Sidney J, da Silva J, Allen TM, Horton H, Venham JE, Rudersdorf RA,Vogel T, Pauza CD, Bontrop RE, DeMars R, Sette A, Hughes AL, Watkins DI

Journal:Nature Medicine

PubMed ID:10545993

Cytotoxic T-lymphocyte (CTL) responses to human immunodeficiency virus arise early after infection, but ultimately fail to prevent progression to AIDS. Human immunodeficiency virus may evade the CTL response by accumulating amino-acid replacements within CTL epitopes. We studied 10 CTL epitopes during the course of simian immunodeficiency virus disease progression in ... More