Kit de vector de expresión de ARNi miR inducible Pol II BLOCK-iT™ con EmGFP

Los kits de vectores de expresión de ARNi miR Pol II BLOCK-iT™ combinan las ventajas de los vectores de ARNi tradicionales (expresión estable y capacidad para utilizar la inserción viral) con las capacidades para la expresión específica de tejidos y la reducción de varias dianas de la misma transcripción. Los kits de vector de expresión de ARNi miR Pol II BLOCK-iT™ y los sistemas de expresión de ARNi miR Pol II lentiviral BLOCK-iT™ están diseñados para expresar miARN artificiales que están diseñados para tener una homología del 100 % en la secuencia diana y dará lugar a la división de la diana. Con el galardonado diseñador de ARNi BLOCK-iT™ de Invitrogen, más del 70 % de las construcciones producen más de un 70 % de reducción. La familia de vectores de la expresión Invitrogen Pol II incluye:

–Fuerte expresión del promotor inmediato-precoz del CMV, con la opción de utilizar promotores específicos de tejidos u otros promotores regulados a través de la recombinación MultiSite Gateway™.
–Compatibilidad con muchos de los vectores de destino (DEST) Gateway™ de Invitrogen’ para la expresión génica de los vectores.

–Capacidad para controlar el inicio de la respuesta de ARNi con un nuevo kit de vectores de expresión de ARNi miR Pol II BLOCK-iT™ con EmGFP.
–Un nuevo vector de destino en el sistema de expresión de ARNi miR Pol III lentiviral HiPerform™ BLOCK-iT™ con EmGFP. El nuevo vector contiene una secuencia estabilizante de ARNm (WPRE) y una secuencia de importación nuclear (cPPT) que generan hasta cinco veces más titulaciones de virus y niveles de expresión de EmGFP. Además, la resistencia a la blasticidina se expresa desde el promotor Pgk-1 de ratón para evitar la parada después de múltiples pasajes.

–La expresión cocistrónica de esmeralda GFP (EmGFP) da como resultado una correlación de la expresión de la EmGFP con la actividad de reducción de su ARNi miR.

–Expresión de más de un ARNi miR diseñado en la misma transcripción, lo que permite la reducción de varios genes de forma simultánea y la generación de fenotipos sintéticos

El nuevo kit de vector de expresión de ARNi miR Pol II inducible BLOCK-iT™ con EmGFP ofrece la capacidad de regular experimentos ARNi. Este kit contiene el vector pT-REx-DEST30 Gateway™, que tras aplicar sencillas técnicas de clonación y transporte, produce un vector de expresión ARNi miR adecuado para la reducción inducible. El vector pT-REx-DEST30 Gateway™ contiene el promotor CMV con dos copias de la secuencia del operador de tetraciclina (tetO2), lo que permite una expresión de alto nivel y regulada. Esto permite el estudio de la pérdida de función en una línea celular transfectada de forma estable incluso si el gen de interés es esencial. Además, la inducción de la expresión de ARNi miR puede ser detenida para que los cambios fenotípicos puedan ser medidos durante la recuperación de la función génica.

Para una variedad de opciones de expresión, el casete ARNi miR, que contiene EmGFP (solo vector miR pcDNA™6.2-GW/EmGFP), las regiones de flanqueo de miR y un miARN homólogo a la diana de interés, se pueden mover fácilmente a una variedad de vectores DEST. Esto ocurre a través de reacciones de recombinación Gateway™ en las que el casete ARNi miR se transfiere a un vector pDONR™ (reacción BP) y luego a un vector DEST (reacción LR) de elección. El sistema HiPerform™ dispone del nuevo vector de destino pLenti6.4/RF R2/V5-DEST para titulaciones de virus altas y expresión de EmGFP.