Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression System

El sistema de expresión Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli utiliza una reacción de transcripción/traducción eficaz y acoplada para producir cantidades de miligramos de proteína soluble, funcionalmente activa en un plazo de 4 a 6 horas. El procedimiento se puede realizar en un solo tubo de reacción y es fácilmente escalable sin necesidad de equipos especializados. Los vectores de expresión TOPO™ TA Cloning (clonación en 5 min con un 95 % de eficacia) se suministran para obtener unos resultados de expresión óptimos. Además de todas las ventajas de un sistema de expresión abierta, la tecnología Expressway™ Maxi proporciona un método para producir altos niveles de proteína recombinante que pueden ser fácilmente detectados y purificados para diversas aplicaciones posteriores.

Producción de proteínas a nivel de miligramo en un plazo de 4 a 6 horas
La clave de la tecnología Expressway™ Maxi reside en la formulación única del tampón de alimentación que aumenta la productividad de la reacción para que se produzca más de un miligramo de proteína en una reacción de 2 ml en un plazo de 4 a 6 horas (Figura 1). La formulación del lisado permite la síntesis de proteínas mediante muestras circulares o lineales.

Compatible con los métodos HTP (alto rendimiento)
Este sistema también está diseñado para la expresión HTP. Un kit sirve para 200 x 50 reacciones, que pueden caber en 2 placas de 96 pocillos. Sin tampón de alimentación, estas reacciones se completan en tan solo dos horas. Una vez que se detecta una expresión positiva, la producción de proteínas escalada se puede realizar con un gran formato sin células Expressway™ o en sistemas basados en células E. coli.

Vectores optimizados
Los vectores pEXP5 TOPO™ TA están optimizados para su uso en el sistema Expressway™ Milligram (Figura 2). Están diseñados para minimizar las secuencias adicionales de aminoácidos que pueden interferir con el plegado y la funcionalidad de las proteínas nativas. Entre las características de estos vectores se incluyen las siguientes:

• El vector de expresión pEXP5-NT/TOPO™ proporciona una etiqueta N-terminal de histidina y un sitio de reconocimiento de proteasas TEV

•™ El vector de expresión pEXP5-CT/TOPO se puede utilizar para expresar proteínas con una etiqueta C-terminal de histidina o nativas introduciendo un codón de parada en el extremo del gen de interés

Procedimiento sencillo y rápido
El sistema de expresión Expressway™ Maxi Cell-Free incluye todos los componentes necesarios para una producción óptima de proteínas sin células. El sistema incluye un extracto de E. coli, un tampón de reacción de IVPS, un tampón de alimentación, una mezcla de enzimas T7, una mezcla de 19 aminoácidos y tubos individuales de metionina. Para iniciar una reacción de 2 ml, mezcle el tampón de reacción, la mezcla de 19 aminoácidos, la de metionina y cisteína etiquetada o no, la de enzimas T7 y la muestra de ADN (con promotor T7) con el extracto de E. coli. Después de una incubación de 30 minutos, añada el tampón de alimentación. Los niveles de miligramos de proteína activa se sintetizarán en un plazo de 4 a 6 horas. Para llevar a cabo una expresión HTP, solo tiene que premezclar todo el componente y el alícuota en un formato HTP.