Expressway™ Mini Cell-Free Expression System

El sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free utiliza una eficaz reacción de transcripción y traducción acoplada para producir proteína recombinante activa. Este sistema elimina los lentos pasos de producción de proteínas basadas en células, incluida la transformación, el cultivo celular y la optimización de la expresión. En solo dos horas, puede producir proteínas adecuadas para una serie de aplicaciones y estudios funcionales posteriores. El sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free ofrece flexibilidad en el diseño de experimentos, lo que le permite:
• Sintetizar proteínas a partir de muestras plásmidas circulares y lineales (p. ej., productos de PCR)
• Realizar síntesis de proteínas de alto rendimiento
• Expresar los genes tóxicos a sistemas in vivo

Cómo funciona:
El sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free incluye todos los componentes que necesita para una producción óptima de proteínas sin células. El kit incluye un extracto de E. coli que contiene la maquinaria celular necesaria para llevar a cabo los procedimientos de transcripción y traducción. También incorpora un tampón de reacción de IVPS (síntesis de proteínas in vitro) y un módulo de aminoácidos para proporcionar los aminoácidos necesarios, así como un sistema de regeneración de ATP. Solo tiene que mezclar el tampón de reacción, la mezcla de aminoácidos, la metionina (etiquetada o sin etiquetar), la mezcla de enzimas T7 y su muestra de ADN (que contiene un promotor T7) con el extracto de E. coli. A medida que se transcribe la muestra de ADN, el extremo 5’ del ARNm está unido por ribosomas y pasa por la traslación, ya que el extremo 3’ de la muestra aún se está transcribiendo (Figura 1).


Proteína funcional simplificada:

El sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free se ha optimizado para obtener una alta producción de proteína funcional de longitud completa a partir de lisados celulares de E. coli (Figura 2). Se suministra con el sistema una exclusiva formulación de tampón de alimentación para aumentar la producción de proteínas.


Contenido y almacenamiento:
El sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free está diseñado para realizar veinte reacciones de 50 µl o una reacción de 1 ml. Este sistema incluye extracto de IVPS E.coli, tampón de reacción de IVPS, tampón de alimentación, mezcla de 19 aminoácidos, metionina, agua sin ADNasa/ARNasa, ARNasa, mezcla de enzimas T7, tubos de reacción de 2 ml y un vector de control de expresión positivo. A continuación se enumeran los vectores sugeridos para su uso con el sistema de expresión Expressway™ Mini Cell-Free. Almacenar los vectores a -20 °C el resto de componentes del kit a -80 °C.