Kits de apoptosis de células muertas con anexina V para citometría de flujo
Kits de apoptosis de células muertas con anexina V para citometría de flujo
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Kits de apoptosis de células muertas con anexina V para citometría de flujo

Evalúe la viabilidad celular con los kits de apoptosis de células muertas con anexina V y tintes fluorescentes conjugados como Alexa Fluor 488, FITC, PI, PE, APC y SYTOX Green.
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Número de catálogoCantidadEtiqueta o tinte
V1324150 ensayosAlexa Fluor 488, yoduro de propidio
V132421 kitFITC, yoduro de propidio
V351121 kitSYTOX Green, R-PE
V351131 kitSYTOX Green, APC
V13245250 ensayosAlexa Fluor 488, yoduro de propidio
Número de catálogo V13241
Precio (MXN)
-
Cantidad:
50 ensayos
Etiqueta o tinte:
Alexa Fluor 488, yoduro de propidio
Diferencie fácilmente células vivas, muertas y apoptóticas durante la citometría de flujo con nuestros kits de apoptosis de células muertas con conjugados de anexina V que incluyen Alexa Fluor 488, FITC, yoduro de propidio, PE, APC y SYTOX Green. Estos conjugados distinguen células vivas, muertas o apoptóticas mediante diferentes tintes, lo cual es fundamental para confirmar la viabilidad celular y la apoptosis mediante estudios multiparamétricos.
Hay varias ventajas en el uso de kits de apoptosis de células muertas con anexina V para citometría de flujo con el fin de analizar la viabilidad celular:

Brillo superior
A diferencia de otros kits de anexina V que tienen concentraciones de proteínas o niveles de purificación más bajos, el conjugado de anexina V Alexa Fluor 488 está optimizado para la citometría de flujo para proporcionar la mayor separación posible entre células apoptóticas y vivas. El tinte Alexa Fluor 488 es un tinte verde fluorescente superior con un espectro similar al de la fluoresceína (FITC o isotiocianato de fluoresceína).

Alta eficacia de unión
Los conjugados de anexina V se obtienen a partir de cisteína-anexina altamente purificada, lo que da como resultado un aumento de la eficacia de unión y una caracterización muy precisa del proceso apoptótico.

Multiparamétrico
Muchas publicaciones requieren un mínimo de dos métodos diferentes para identificar células apoptóticas. Este kit multiparamétrico detecta fosfatidilserina (PS) sobre la superficie citoplasmática de la membrana celular, mientras que la integridad de la membrana se determina mediante yoduro de propidio.

Kit de apoptosis de células muertas con anexina V Alexa Fluor 488 y PI
El kit de apoptosis de células muertas con anexina V Alexa Fluor 488 y yoduro de propidio (PI) (V13241, V13245) se utiliza en citometría de flujo para medir la apoptosis temprana mediante la detección de la expresión de fosfatidilserina (PS) y la permeabilidad de la membrana. Cuando las células se tiñen con anexina V y yoduro de propidio, las células apoptóticas que expresan PS muestran fluorescencia verde, que se puede detectar en el canal del FITC, así como baja fluorescencia roja. Las células muertas o necróticas muestran fluorescencia de color rojo brillante y ninguna fluorescencia verde, mientras que las células vivas no muestran ninguna fluorescencia, ni verde ni roja.

Kit de apoptosis de células muertas con anexina V PE y SYTOX Green
El kit de apoptosis de células muertas con anexina V PE y SYTOX Green detecta la externalización de PS en células apoptóticas durante la citometría de flujo mediante la anexina V recombinante conjugada con la ficobiliproteína R-PE fluorescente naranja, mientras que las células muertas se detectan con la tinción de ácido nucleico SYTOX Green. Después del tratamiento con ambas sondas, las células apoptóticas muestran una fluorescencia naranja, las células muertas se muestran con una fluorescencia verde y las células vivas muestran poca o ninguna fluorescencia. Estas poblaciones pueden distinguirse fácilmente en los filtros de paso de banda de 530/30 nm y 585/42 nm con un citómetro de flujo láser de 488 nm.

Kit de apoptosis de células muertas con anexina V APC y SYTOX Green
El kit de apoptosis de células muertas con anexina V APC y SYTOX Green detecta la externalización de PS en células apoptóticas durante la citometría de flujo mediante la anexina V recombinante conjugada con aloficocianina excitada por láser rojo, y las células muertas mediante la tinción de ácido nucleico SYTOX Green. Las células apoptóticas se detectan mediante la unión de la anexina V al PS externalizado. Las células vivas muestran poca o ninguna fluorescencia, las células apoptóticas muestran fluorescencia roja y muy poca fluorescencia verde, y las células apoptóticas tardías muestran un nivel más alto de fluorescencia roja y naranja. Estas poblaciones pueden distinguirse fácilmente utilizando un citómetro de flujo con fuentes de excitación de 488 nm y 633 nm (un láser de iones de argón y uno HeNe).

Kit de apoptosis de células muertas con anexina V FITC y PI
El kit de apoptosis de células muertas con anexina V FITC y PI detecta la externalización de PS en células apoptóticas mediante la anexina V recombinante conjugada con colorante FITC verde fluorescente, y las células muertas mediante PI. Las células necróticas que se tiñen con PI muestran fluorescencia roja. Después del tratamiento con ambas sondas, las células apoptóticas muestran una fluorescencia verde, las células muertas se muestran con fluorescencia roja y verde, y las células vivas muestran poca o ninguna fluorescencia.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
DescripciónKit de apoptosis de células muertas con anexina V Alexa Fluor 488 y yoduro de propidio (PI)
Excitación/emisión499, 535/521, 617
Líneas láser del citómetro de flujo488
Para utilizar con (equipo)Microscopio de fluorescencia, citómetro de flujo
Contenido del kitContiene 1 vial de conjugado de anexina V, Alexa Fluor 488 (250 µl), 1 vial de yoduro de propidio (PI, 100 µl) y 1 frasco de tampón de unión de anexina (solución 5X, 15 ml).
Etiqueta o tinteAlexa Fluor 488, yoduro de propidio
Tipo de productoKit de detección de apoptosis
Cantidad50 ensayos
Condiciones de envíoHielo húmedo
Unit Size50 assays
Contenido y almacenamiento
Almacenar en el refrigerador (2 °C a 8 °C) y proteger de la luz.

Preguntas frecuentes

When using Dead Cell Apoptosis Kits with Annexin V for Flow Cytometry, what does a PI+ only population (hence Annexin V negative) correspond to?

These products are cells that died without undergoing apoptosis. A PI+ only population could be either a result of experimental condition or sample preparation.

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I trypsinized my adherent cells and labeled with annexin V, and now my flow data is showing a high percentage of apoptotic cells even for control, untreated cells. What is the problem?

Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. Allow the cells to recover for about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium after trypsinizing/scraping so that they can recover their membrane integrity before staining. For lightly adherent cell lines, such as HeLa and NIH 3T3, another option is to use non-enzyme treatments like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I detect annexin V staining in an imaging assay?

Annexin V staining is not typically used in imaging experiments; it is a better reagent for flow cytometry analysis. All cells will stain to some extent, so it can be difficult to distinguish a relatively bright annexin V-stained cell from a dimmer non-apoptotic cell. Caspase activation, detected using our CellEvent Caspase 3/7 or Image-iT LIVE Caspase detection kits, is a better method for detecting apoptosis in an imaging assay.

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When should I stain adherent cells with annexin V for flow cytometric analysis? Before or after I trypsinize them?

Trypsinize first and then allow the cells to recover about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium before staining with annexin V conjugates. Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing for annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. For lightly adherent cell lines such as HeLa and NIH 3T3, you could use a less harsh (non-enzymatic) dissociation product like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I fix my cells after annexin V staining?

Yes, this is possible. We have established protocols for annexin V staining combined with intracellular staining of lymphocytes that can be found here. The most important step is to leave some binding buffer in the suspension when fixation is started. Compared to staining of live cells, the intensity of the annexin V signal may be somewhat reduced.

Citations & References (22)

Citations & References
Abstract
H2AX phosphorylation within the G1 phase after UV irradiation depends on nucleotide excision repair and not DNA double-strand breaks.
Authors:Marti TM, Hefner E, Feeney L, Natale V, Cleaver JE
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:16788066
'The variant histone H2AX is phosphorylated in response to UV irradiation of primary human fibroblasts in a complex fashion that is radically different from that commonly reported after DNA double-strand breaks. H2AX phosphorylation after exposure to ionizing radiation produces foci, which are detectable by immunofluorescence microscopy and have been adopted ... More
Aberrant T cell differentiation in the absence of Dicer.
Authors:Muljo SA, Ansel KM, Kanellopoulou C, Livingston DM, Rao A, Rajewsky K
Journal:J Exp Med
PubMed ID:16009718
'Dicer is an RNaseIII-like enzyme that is required for generating short interfering RNAs and microRNAs. The latter have been implicated in regulating cell fate determination in invertebrates and vertebrates. To test the requirement for Dicer in cell-lineage decisions in a mammalian organism, we have generated a conditional allele of dicer-1 ... More
Nuclear relocation of the nephrin and CD2AP-binding protein dendrin promotes apoptosis of podocytes.
Authors:Asanuma K, Campbell KN, Kim K, Faul C, Mundel P
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:17537921
'Kidney podocytes and their slit diaphragms (SDs) form the final barrier to urinary protein loss. There is mounting evidence that SD proteins also participate in intracellular signaling pathways. The SD protein nephrin serves as a component of a signaling complex that directly links podocyte junctional integrity to actin cytoskeletal dynamics. ... More
An anti-transferrin receptor-avidin fusion protein exhibits both strong proapoptotic activity and the ability to deliver various molecules into cancer cells.
Authors:Ng PP, Dela Cruz JS, Sorour DN, Stinebaugh JM, Shin SU, Shin DS, Morrison SL, Penichet ML
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:12149472
'We have developed an antibody fusion protein (anti-rat TfR IgG3-Av) with the ability to deliver different molecules into cancer cells. It consists of avidin genetically fused to the C(H)3 region of a human IgG3 specific for the rat transferrin receptor. It forms strong, noncovalent interactions with biotinylated molecules such as ... More
Protein kinase Cepsilon activates protein kinase B/Akt via DNA-PK to protect against tumor necrosis factor-alpha-induced cell death.
Authors:Lu D, Huang J, Basu A
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16785234
'We have previously shown that protein kinase Cepsilon (PKCepsilon) protects breast cancer cells from tumor necrosis factor-alpha (TNF)-induced cell death. In the present study, we have investigated if the antiapoptotic function of PKCepsilon is mediated via Akt and the mechanism by which PKCepsilon regulates Akt activity. TNF caused a transient ... More