Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit
Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit

El kit de ensayo de brillo de luciferasa de luciérnaga Thermo Scientific Pierce proporciona una señal de bioluminiscencia brillante yMás información
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Número de catálogoCantidad
16176Kit de 100 reacciones
16177Kit para 1000 reacciones
Número de catálogo 16176
Precio (USD)
217,08
Each
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Cantidad:
Kit de 100 reacciones
Precio (USD)
217,08
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El kit de ensayo de brillo de luciferasa de luciérnaga Thermo Scientific Pierce proporciona una señal de bioluminiscencia brillante y estable (vida útil media superior a 2 horas) en presencia indicadores de luciferasa de luciérnaga.

Características del kit de ensayo de brillo de luciferasa de luciérnaga:

Sensible: detección muy sensible de la actividad de la luciferasa de luciérnaga; para obtener los mejores resultados (señal máxima), utilice el potenciador de la señal de la luciferasa de luciérnaga Pierce
Estable: mayor estabilidad de la señal en comparación con los ensayos de flash
Simple: no requiere un luminómetro con inyectores
Compatible: reactivos de ensayo compatibles con otras luciferasas de luciérnaga
Compatible con la automatización: adecuado para ensayos de alto rendimiento
Práctico: contiene un tampón de lisis celular universal y un reactivo de ensayo de brillo optimizado
Seguro: permite realizar ensayos no radioactivos

Este kit de ensayo de brillo de luciferasa Pierce contiene reactivos para medir la actividad de la luciferasa de luciérnaga en lisados celulares. En presencia de luciferasa de luciérnaga, el reactivo de brillo proporciona una señal bioluminiscente estable y está muy recomendado para su uso con luminómetros sin inyectores o para el procesamiento por lotes de muestras. La salida de luz generada por la reacción de la luciferasa puede correlacionarse con la cantidad de proteína de la luciferasa producida, que a su vez es proporcional a la actividad del promotor de la expresión de conducción de la luciferasa. Aunque los reactivos de ensayo de brillo se han optimizado para ofrecer los mejores resultados cuando se utilizan con los plásmidos de luciferasa de luciérnaga Thermo Scientific, este kit de ensayo puede utilizarse para detectar la actividad de otras luciferasas de luciérnaga o relacionadas con el ATP que utilizan D-luciferina como sustrato.

Incluye
: Tampón de lisis celular, tampón y sustrato de reacción; adquiera el potenciador de la señal de la luciferasa por separado.

Requiere:
• Luciferasa de luciérnaga y luminómetro u otro instrumento capaz de controlar la luminiscencia, como los lectores de microplacas Thermo Scientific Luminoskan Ascent y Varioskan Flash
• Para obtener los mejores resultados (señal máxima), utilizar con el potenciador de la señar de la luciferasa Pierce

Aplicaciones:
• Estudios de promotores para analizar los elementos reguladores cis y los factores de acción trans
• Cribaje de fármacos
• Cribaje de siRNA y miRNA
• Ensayos multiplex para estudiar los efectos inespecíficos
• Ensayos de localización de proteínas
• Análisis de la vía de transducción de señal
• Estudios de empalme de ARN

La luciferasa de luciérnaga es una proteína de 60 kDa que producen de forma natural varias especies de la familia de los coleópteros «Lampyridae», en la que se incluyen los géneros Photinus y Luciola. La señal bioluminiscente de la luciferasa de luciérnaga proviene de la oxidación de la D-luciferina. La salida de luz que genera la reacción de la luciferasa se captura con luminómetro y puede correlacionarse con la cantidad de proteína de luciferasa de luciérnaga producida y utilizada para determinar la actividad del promotor que impulsa la expresión de la luciérnaga. La luciferasa nativa de luciérnaga produce una fuerte señal de flash que se descompone rápidamente. La señal que se genera con el kit de ensayo de brillo de luciferasa de luciérnaga Pierce es más estable y se descompone muy lentamente, eliminando así la necesidad de utilizar un luminómetro con inyectores.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
ensayoEnzima indicadora, ensayo de indicador de luciferasa
Células compatiblesCélulas de mamíferos
Método de detecciónBioluminiscente
Para utilizar con (equipo)Luminómetro (microplaca)
FormatoPlaca de 384 pocillos, placa de 96 pocillos
Tipo de etiquetaEnzima etiquetada
Línea de productosPierce
CantidadKit de 100 reacciones
SustratoD-luciferina
Propiedades de sustratoSustrato químico
Tipo de sustratoSustrato de luciferasa
ObjetivoLuciferasa, luciferasa de luciérnaga
TécnicaQuimioluminiscencia mejorada
TipoKit de ensayo
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• Tampón de ensayo Glow de luciérnaga, 5 ml, almacenar a -20 °C
• D-luciferina, liofilizada, 3 mg, almacenar a 4 °C
• Tampón de lisis celular 2X, 6 ml, almacenar a temperatura ambiente

Tras su recepción, almacenar el kit a -20 °C o almacenar los componentes individuales como se ha indicado con anterioridad.

Preguntas frecuentes

I got a high background signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. Why is this?

This could be due to contamination of the control sample. Make sure to use new sample and change pipette tips after each well.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

I got a high signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample 
    Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay



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    What could be causing no signal or low signal with the Firefly Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Do you have any suggestions to get around this problem?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - D-luciferin auto-oxidized: Protect substrate from light and maintain 100X D-luciferin at -20 degrees C; Prepare new Working Solution if used longer than 4 hours.
    - Low luciferase expression: Use Pierce Firefly Signal Enhancer (100X) (Cat. No. 16180); Lyse cells in a smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Degraded luciferase protein: Store cell lysates on ice and perform assays immediately following cell lysis.

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    I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
    - Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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    I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

    This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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