Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

El kit de ensayo doble de luciferasa de Renilla y de luciérnaga de Thermo Scientific proporciona los reactivos necesarios para detectar simultáneamente la actividad de luciferasa intracelular de Renilla y de luciferasa roja en lisados de células completas de mamíferos.

Características del kit de ensayo doble de luciferasa de Renilla y de luciérnaga:

• Simultáneo: detección concurrente, basada en filtros, separada por longitud de onda de dos actividades de luciferasa
• Sensible: mida las actividades de la luciferasa de Renilla verde y de luciérnaga roja en la misma muestra
• Rápido: no se requiere el paso de enfriamiento, a diferencia de los ensayos dobles secuenciales tradicionales
• Multiplex: capaz de cuantificar dos actividades celulares en la misma muestra

El kit de ensayo doble de luciferasa de luciérnaga y de Renilla Pierce es un ensayo altamente sensible que permite la detección simultánea de la actividad de la luciferasa de Renilla verde y de luciérnaga roja. La luciferasa de Renilla verde actúa como indicador experimental con la de luciérnaga roja constitutivamente activa como control de normalización. Como se muestra en el siguiente vídeo animado, esta combinación de indicador y control permite la monitorización simultánea de las actividades de luciferasa de indicador y control experimentales en un ensayo de lectura única sin necesidad de añadir dos pasos de reactivos de sustrato o de enfriamiento. La solución de trabajo del ensayo contiene sustratos para ambas luciferasas, y las reacciones se producen simultáneamente con la cinética de tipo flash. Las señales luminiscentes resultantes son resolubles espectralmente mediante filtros. En una sola muestra, los investigadores pueden analizar la actividad transcripcional de los elementos reguladores, las vías de transducción de señales y los efectos de los activadores o inhibidores.

Incluye:
Tampón de lisis celular, tampón de reacción y sustratos coelenterazina y D-luciferina

Requiere:
Indicadores de luciferasa de Renilla verde y de luciérnaga roja; conjunto de filtros a 525 nm ± 20 nm para la luciferasa de Renilla verde y de 615 a 675 nm para la luciferasa de luciérnaga roja. Luminómetro u otro instrumento capaz de controlar la luminiscencia, como los lectores de microplacas Luminoskan Ascent y Varioskan Flash y de Thermo Scientific; inyector necesario para evaluar más de 24 pocillos a la vez.

Aplicaciones:
• Estudiar dos elementos normativos al mismo tiempo
• Controlar dos vías de señalización simultáneamente
• Permitir el estudio de más de un blanco por pantalla (p. ej., efectos inespecíficos)

La luciferasa de Renilla verde produce una señal bioluminiscente más brillante que las luciferasas de luciérnaga y de Renilla nativa. La señal bioluminiscente (λmáx. = 535 nm) que produce la luciferasa de Renilla verde es el resultado de la oxidación de coelenterazina. El segundo ensayo utiliza luciferasa de luciérnaga roja, que es una forma mutada de la luciferasa de luciérnaga japonesa o Luciol cruciata. Esta luciferasa produce un espectro de emisión rojo (λmáx = 613nm), resultado de la oxidación de la D-luciferina en presencia de ATP.

Más datos del producto
• Detección simultánea de la emisión doble en ensayos de indicador de la luciferasa

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