Transcriptasa inversa SuperScript™ II
Transcriptasa inversa SuperScript™ II
Invitrogen™

Transcriptasa inversa SuperScript™ II

La transcriptasa inversa Invitrogen SuperScript II es una transcriptasa inversa (RT) MMLV de ingeniería genética con una actividad reducida deMás información
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La transcriptasa inversa Invitrogen SuperScript II es una transcriptasa inversa (RT) MMLV de ingeniería genética con una actividad reducida de ARNasa H y una mayor estabilidad térmica en comparación con la RT MMLV de tipo salvaje. Las mutaciones en el dominio ARNasa H de la enzima eliminan la degradación del ARN durante la síntesis de la primera cadena de ADNc, lo que resulta en un mayor rendimiento de ADNc de longitud completa.

Los SuperScript RT son los RT más fiables y ampliamente utilizados con más de 50.000 citas, revisiones y publicaciones hasta la fecha.

Nota: El último miembro de la familia SuperScript RT, la transcriptasa inversa SuperScript IV, presenta una termoestabilidad, procesividad, rendimientos y actividad mejorados con cualquier muestra de ARN, incluidas las de pureza o integridad subóptimas.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoEnzima independiente
N.º de reacciones50 reacciones
Temperatura óptima de reacción42 °C
Cantidad10.000 unidades
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaSuperScript II
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoHielo húmedo
Tamaño (producto final)Hasta 12,3 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Concentración200 U/μl
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Velocidad de reacción50 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La transcriptasa inversa SuperScript™ II (10.000 unidades en total, a 200 U/μl) se suministra con un vial de un tampón de primera cadena 5X [250 mm de Tris-HCl (con un pH de 8,3), 375 mm de KCl, 15 mm de MgCl2] y un vial de 100 mm de DTT.

Preguntas frecuentes

How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?

We recommend using ezDNase (Cat. No. 11766051). ezDNase Enzyme's high specificity for double-stranded DNA enables efficient and fast genomic DNA removal without reduction in the quality or quantity of RNA. ezDNase Enzyme is heat-labile and so can be easily deactivated by heat treatment at moderate temperature (55 degrees C). These features make ezDNase Enzyme an excellent choice for genomic DNA removal prior to reverse transcription reactions.

How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?

The amount of RNA template for a cDNA synthesis is highly flexible and depends upon the amount of sample available and an individual's need. In general, 1 µg total RNA is used in a typical 20-µL RT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourReverse Transcription and RACE Support Center.

Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?

RNase H treatment is not always necessary. Many PCR reactions work without it. However, for cDNA synthesized with RNase H-deficient reverse transcriptases (like SuperScript II, III, and IV), RNA/cDNA hybrids—especially GC-rich ones—may not denature well, reducing PCR sensitivity. RNase H treatment can help in such cases. Additionally, RNase H treatment is beneficial for cloning larger fragments.

What percentage of RNA is converted to cDNA when performing reverse transcription?

This depends highly on the quality of the sample. mRNA itself makes up 1-5% of total RNA. Depending on the primer and enzyme used, reverse transcription can covert >70% of that into cDNA.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Reverse Transcription and RACE Support Center.

I'm setting up my RT reaction and am trying to decide whether I should use random primers, oligo(dT) primer, gene-specific primer, or oligo(dT)/random mix primers. What would you suggest?

Random primers are the best choice for degraded RNA, RNA with heavy secondary structure, non-polyadenylated RNA, or prokaryotic RNA. It is recommended only for two-step RT-PCR, and typically gives the highest yields, although the cDNA may not necessarily be full length. Oligo(dT) primers are good to use when trying to recover full-length cDNA from 2-step RT-PCR. The reaction is influenced by secondary structure and RNA quality. Gene specific primers should be used for very specific, mainly one-step RT-PCR reactions.

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