Pierce™ Quantitative Peptide Assays & Standards

Los ensayos de péptidos cuantitativos fluorescentes o colorimétricos Pierce son ensayos de microplacas fáciles de mezclar y de leer con señales estables para una medición precisa y sólida de muestras de digeridos de péptidos. Se proporciona un patrón de referencia de digestión de péptidos de alta calidad de forma independiente o en los kits para usar en la generación de curvas estándar lineales para mejorar la precisión y la reproducibilidad. El aumento de la sensibilidad, el bajo volumen de ensayo de la muestra y el patrón de referencia incluido son esenciales para una medición precisa y sólida de muestras de digestión de péptidos para la normalización de la cantidad de inyección de muestra para el análisis de MS.

• Sensible: detecta con precisión tan solo 5 µg/ml (fluorométrico) o 25 µg/ml (colorimétrico) de mezcla de péptidos
• Reproducible: rendimiento del ensayo rigurosamente probado usando mezclas de digestión de péptidos
• Patrón resistente de digestión de péptidos: el kit incluye un patrón de digestión de péptidos validado para mejorar la reproducibilidad de la cuantificación
• Compatible: funciona con muchos reactivos, incluidos los reactivos de preparación de muestras de MS y los péptidos marcados con TMT (ensayo fluorométrico)
• Práctico: formato fácil de mezclar y de leer con señal estable que se puede leer en tan solo 5 minutos (fluorométrico) o 15 minutos (colorimétrico)

El ensayo de péptido colorimétrico cuantitativo Pierce proporciona reactivos BCA modificados para la reducción de Cu+2 a Cu+1, un quelante patentado optimizado para la cuantificación de mezclas de péptidos y un patrón de referencia de digestión de péptidos para usar en la generación de curvas estándar lineales de control. Este ensayo colorimétrico de péptidos requiere una pequeña cantidad de muestra (20 µl) y tiene un rango de concentración de péptidos de trabajo de 25 a 1000 μg/ml. En la reacción, el cobre se reduce primero por la cadena principal de amida de los péptidos en condiciones alcalinas (reacción de Biuret), seguido por el acoplamiento del quelante con el cobre reducido para formar un complejo rojo brillante (se absorbe a 480 nm) que se puede leer en tan solo 15 minutos. La señal producida por esta reacción es entre 3 y 4 veces más sensible que el ensayo de proteínas Micro-BCA para el análisis de péptidos. El ensayo colorimétrico de péptidos es compatible con los péptidos marcados con TMT, pero no se recomienda para los péptidos sintéticos, porque el ensayo se ve afectado por el contenido de aminoácidos del péptido.

Los reactivos del ensayo fluorescente cuantitativo de péptidos Pierce incluyen tampón de ensayo de péptidos, reactivo de etiquetado de péptidos fluorescentes y un patrón de ensayo de digestión de péptidos para la medición cuantitativa de las concentraciones de péptidos. Este ensayo sensible necesita solo 10 µl de muestra, produce una respuesta lineal con concentraciones de péptidos crecientes (de 5 a 1000 μg/ml) y produce una fluorescencia final estable que puede detectarse en tan solo 5 minutos. En este ensayo, los péptidos se marcan específicamente en el extremo amino utilizando un reactivo fluorescente reactivo a amina que no es fluorescente hasta que reacciona con péptidos trípticos. Los péptidos marcados con fluorescencia se detectan en un lector de microplacas (ex390/em475). Este ensayo es adecuado para la medición cuantitativa de mezclas de digestiones de péptidos y péptidos sintéticos con un extremo amino no bloqueado. Los ensayos fluorescentes no son compatibles con los péptidos marcados con TMT.

El patrón de ensayo de digestión de péptidos Thermo Scientific se diseñó como un patrón de referencia para su uso con los ensayos de péptidos colorimétricos y fluorométricos cuantitativos Pierce para mejorar la reproducibilidad y la precisión de la cuantificación de péptidos. El patrón de ensayo de digestión de péptidos se proporciona en formato líquido listo para usar a 1 mg/ml. La proteína de referencia se ha digerido con tripsina de grado MS para minimizar las escisiones perdidas. Para ayudar a garantizar un rendimiento consistente, se supervisa la eficacia de la digestión de proteínas para ayudar a garantizar la consistencia entre lotes, y la calidad se evalúa en comparación con un estándar de referencia.

Aplicaciones
• Normalización de las concentraciones de muestras para aplicaciones cuantitativas posteriores
• Normalización de los volúmenes de carga de muestras para aplicaciones de LC, MS y LC/MS
• Medición de la recuperación tras procedimientos de limpieza de péptidos