Ensayo de referencia de número de copia TaqMan™, humano, ARNasa P

Los ensayos de referencia de número de copias TaqMan™ humanas se ejecutan con los ensayos de número de copias TaqMan™ humanas en una reacción de PCR en tiempo real dúplex para detectar y medir las variaciones de número de copias (CNVs) y regiones más pequeñas en el genoma humano.Se ofrecen dos opciones de genes que se pueden utilizar como genes de referencia endógena en humanos:ARNasa P y TERT.Los ensayos de referencia de número de copias TaqMan™ se han diseñado para secuencias genómicas únicas en el conjunto de genoma de referencia (versión GRCh38) y son necesarios para la cuantificación relativa de los objetivos de número de copias.

Los ensayos de número de copias TaqMan™ cuantifican el gen de interés y lo normalizan en un gen endógeno que se sabe que está presente en dos copias de un genoma diploide.Tenga en cuenta que los ensayos de referencia de número de copias TaqMan™ son específicos de la especie.

ARNasa P:La opción de gen de referencia estándar
Los ensayos de referencia de número de copias TaqMan™ tienen una sonda TAMRA™ marcada con colorante VIC™ e imprimadores directos e inversos específicos de la secuencia de referencia.Los ensayos no están limitados por el imprimador. Se recomienda

el ensayo de referencia de número de copias TaqMan™ ARNasa P como ensayo de referencia estándar para análisis de número de copias.Este ensayo detecta el gen (RPPH1) del componente H1 de ARN P ribonucleasa (H1ARN) en el cromosoma 14, citobanda 14q11.2.La ubicación del ensayo es chr.14:20343370 en la versión GRCh38.Tiene un amplicón de 87 bp que se encuentra en el gen RPPH1 de exón único.

El ensayo de referencia de número de copias TaqMan™ TERT es un ensayo de referencia alternativo; se recomienda en el caso de que el ensayo con ARNasa P funcione de manera deficiente con una muestra debido a aberraciones cromosómicas u otros problemas.Este ensayo detecta el gen de la transcriptasa inversa de la telomerasa (TERT) ubicado en el cromosoma 5, citobanda 5p15.33.La ubicación del ensayo es chr5:1253257 en la versión GRCh38.Tiene un amplicón de 88 bp que se encuentra en el exón 16 del gen TERT.

Flujo de trabajo de análisis de número de copia más simple
Los ensayos de número de copias Taqman™ tienen el flujo de trabajo más simple de todos los métodos de análisis de número de copia disponibles actualmente.El ensayo de análisis (etiquetado con colorante FAM™), el ensayo de referencia (etiquetado con colorante VIC™), su muestra de ADN y la mezcla maestra TaqMan™ se combinan y posteriormente se procesan en un sistema de PCR en tiempo real Applied Biosystems™, mediante el protocolo estándar de ensayo de número de copias TaqMan™.De media, la configuración para el análisis primario solo tarda 3–4 horas (incluyendo una secuencia de PCR de aproximadamente 2 horas).

Potente software de análisis de datos
El software CopyCaller™ se desarrolló específicamente para el análisis de datos de ensayo de número de copias TaqMan™.Este software gratuito y fácil de usar utiliza una interfaz gráfica que calcula rápidamente los números de copias posibles para un conjunto de muestras en un ciclo.También ofrece un valor de confianza para cada llamada al número de copias y tiene funcionalidad de valores atípicos.