El kit de preparación de estabilización sanguínea del ácido nucleico C_T™ para qPCR permite un análisis directo a partir de una alícuota de 500 µl de sangre humana completa recogida en tubos de ARN PAXgene™ o Tempus™ sin la purificación convencional de ARN. Este procedimiento sencillo crea un lisado que puede ir directamente a la transcripción inversa y PCR en tiempo real con la sensibilidad y especificidad equivalente al ARN purificado convencionalmente. Este kit ahorra tiempo, genera muchos menos residuos y ofrece un flujo de trabajo sencillo que puede utilizarse con unas pocas muestras o incorporarse fácilmente a aplicaciones automatizadas de alto rendimiento.

• Detectar ARN total de PAXgene™ (incluido el miRNA) o tubos de ARN en sangre Tempus™ sin purificación
• Preparación rápida: de 96 muestras para RT-PCR en tiempo real a base de TaqMan™ en menos de 1 hora
• Muestras robustas: de 500 µl procesadas a temperatura ambiente con resultados equivalentes a los de muestras de ARN purificadas
• Formato flexible: las muestras pueden prepararse en tubos de microcentrífuga o placas de 96 pocillos automatizadas o manuales

Flujo de trabajo simple sin sacrificar sensibilidad Especificidad
El proceso consiste en peletear y lavar una alícuota de 500 μl del tubo de sangre, seguido de un paso único de digestión⁄ADNasa que preserva la integridad del ARN. La preparación tiene lugar completamente a temperatura ambiente, a diferencia de otros productos que requieren pasos de incubación a una temperatura específica. Se pueden preparar hasta 96 muestras en menos de una hora, la mitad del tiempo que tarda la purificación competitiva de columnas de centrifugación en procesar solo 12 muestras, con menos esfuerzo práctico. El lisado resultante puede pasar directamente a reacciones qRT-PCR de un paso o de dos pasos o almacenarse para su uso posterior (1 hora a 4 °C o 5 meses congelado). Este procedimiento sencillo se lleva a cabo en el mismo pocillo de procesamiento de muestras, de principio a fin, lo que significa que no se transfieren las muestras. Los datos de RT-PCR en tiempo real generados a partir del lisado son equivalentes a los resultados obtenidos a partir del ARN purificado convencionalmente de los mismos tubos y se han validado con los siguientes reactivos de qPCR:
• Kit Applied Biosystems’ High Capacity RNA-to-cDNA™ y mezcla maestra de expresión génica TaqMan™
• Kit de síntesis de ADNc Invitrogen SuperScript™ VILO™ y mezcla maestra de expresión génica TaqMan™
• Kit Applied Biosystems’ para la transcripción inversa de microARN TaqMan™ y mezcla maestra universal Taqman™ II
• Kit Applied Biosystems’ de mezcla maestra de reactivos RT-PCR de un paso TaqMan™
Los reactivos de transcripción inversa para la síntesis de ADNc, las mezclas maestrasTaqMan™ y los ensayos de análisis de PCR en tiempo real TaqMan™ se venden por separado.

El número total de reacciones de transcripción inversa y PCR posibles a partir de una sola muestra inicial depende de los requisitos mínimos de muestra de los kits de RT-PCR que vayan a utilizarse. Consulte la documentación del usuario para obtener más información.

Examinar, Detectar o Validar
Para usuarios con genes específicos de interés, el kit de preparación de estabilización sanguínea del ácido nucleico C_T™ para qPCR fue diseñado para permitir el cribado rápido a partir de una pequeña cantidad de muestra inicial (aproximadamente el 5 % del volumen total de un tubo PAXgene™ debidamente llenado o tubo de ARN de sangre Tempus™ por muestra). El resto del tubo de sangre se puede archivar para su uso posterior o purificar según sea necesario.

Quienes realicen experimentos de descubrimiento o validación con análisis RT-PCR en tiempo real ahorrarán esfuerzo, tiempo y costes generales con el kit de preparación de ácidos nucleicos estabilizados Blood-to-C_T™ para qPCR, a la vez que se emplea un proceso ampliable que permite a los laboratorios superar las dificultades de la purificación convencional y, finalmente, empezar a procesar las muestras con facilidad.

Análisis miARN
Con el creciente énfasis en el ARN no codificado y su papel regulador en el desarrollo y la enfermedad, es tranquilizador saber que estas pequeñas pero importantes moléculas de ARN pueden detectarse correctamente con el kit de preparación de ácidos nucleicos estabilizados Blood-to-C_T™ para qPCR. Nuestros científicos han probado el lisado con el kit de transcripción inversa de MicroARN TaqMan™ Applied Biosystems y la mezcla maestra universal TaqMan™ II frente a un amplio panel de ensayos de microARN TaqMan™ y han generado resultados iguales o mejores que los del producto de purificación miARN del competidor líder.

Reducción del espacio y menos residuos para más ahorro
Los productos competitivos, especialmente los métodos basados en columnas, generan cantidades considerables de residuos plásticos y biológicos peligrosos por muestra (columnas de centrifugación, puntas, tubos de microcentrífuga y reactivos). El kit de preparación de ácidos nucleicos estabilizados Blood-to-C_T™ para qPCR simplifica el flujo de trabajo, por lo que la cantidad total de residuos plásticos es un 75 % menor en peso para un número comparable de muestras procesadas a través de columnas. El kit no genera residuos orgánicos. También se reduce el espacio para maximizar la capacidad del congelador. La reducción del desecho de residuos peligrosos y el menor consumo de plástico se traducen en un ahorro en el coste, así como en una reducción del impacto medioambiental.

Para usuarios que necesitan purificación completa:Si aún se requiere purificación de ARN convencional para el tubo de sangre restante, utilice el kit de aislamiento de ARN MagMAX™ para tubos de sangre estabilizados. Este producto maximiza la producción del ARN total (incluido el miARN) de los tubos de ARN en sangre PAXgene™ o Tempus™ mediantela tecnología probada de separación basada en microesferas magnéticas.

Gama única y completa: El kit de preparación de ácidos nucleicos Blood-to-C_T™ estabilizado para qPCR es compatible con nuestra gama de productos (incluidas las mezclas maestras de RT y PCR que se deben adquirir por separado). Simplifique el proceso de pedido y reduzca los costes de transporte al realizar un pedido mayor de un único proveedor.

Especificaciones:
• Compatibilidad: tubos de ARN en sangre PAXgene™ o Tempus™
• Tiempo de procesamiento: inferior a 1 hora
• Formato: tubos de microcentrífuga, placas de 96 pocillos
• Equipo necesario: centrífuga estándar con capacidad para centrigufar a 5000 x g con adaptadores de tubo para microcentrífuga o placas de 96 pocillos y vórtex para tubos de microcentrífuga o placas de 96 pocillos
• Número de preparaciones: 50 reacciones

NOTA: Los tubos de sangre, los reactivos de transcripción inversa para síntesis de ADNc, y las mezclas maestras TaqMan™ para el análisis PCR en tiempo real se venden por separado.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

PAXgene™ y PreAnalytiX™ son marcas comerciales registradas de PreAnalytiX GmbH. En este documento no se implica ningún patrocinio, promoción o afiliación.