Pierce™ Conjugate Purification Kit

El kit de purificación de conjugados Thermo Scientific Pierce es un suave sistema de cromatografía de afinidad para purificar anticuerpos conjugados con peroxidasa de rábano (HRP) o fosfatasa alcalina (AP) de una enzima que no ha reaccionado después del etiquetado.

Características del kit de purificación de conjugados:

• Específico para IgG: el procedimiento está diseñado para eliminar las enzimas HRP o AP de los anticuerpos IgG; no apto para su uso con IgM, IgY, fragmentos Fab o conjugados de estreptavidina
• Kit completo: incluye columnas de afinidad, tampones de activador y elución, columna de desalinización y tampones de almacenamiento para conjugados de HRP y AP
• Alta capacidad: el kit de columnas de un solo uso está diseñado para la purificación de 0,5 a 50 mg de conjugado de anticuerpo disuelto en solución salina tamponada con Tris
• Mejora los ensayos: la eliminación de la enzima no conjugada de los conjugados de anticuerpos suele reducir el fondo y mejorar el rendimiento general de los inmunoensayos

Este kit de purificación de conjugados está diseñado para eliminar el exceso de enzima no conjugada HRP o Alk-Phos de los anticuerpos etiquetados (IgG) después de realizar reacciones de conjugación anticuerpo-enzima. La columna de resina de agarosa con quelato metálico se une a los conjugados IgG-enzima pero permite el paso de la enzima no conjugada (HRP o AP). Un tampón de elución suave y no desnaturalizante recupera el conjugado IgG-HRP o IgG-AP totalmente activo. Las columnas de desalinización incluidas intercambian el conjugado purificado en cualquier tampón de elección, listo para su uso en varios métodos de inmunodetección.

En el procedimiento de este kit, la agarosa quelada con níquel se une a la IgG a través de un grupo rico en histidina en la región Fc, en las uniones de los dominios Cγ2 y Cγ3, que está muy bien conservado en todas las IgG de mamíferos. Las IgG purificadas de oveja, ratón, cabra, rata y conejo se unen a la resina quelada de níquel. Los conjugados enzimáticos de avidina o estreptavidina no se pueden purificar por este método porque no se unen a la agarosa quelada con níquel. Además, este kit no puede usarse para purificar anticuerpos del suero, ya que otras proteínas del suero también se unirán a la columna de níquel.

La eliminación de la enzima no conjugada utilizando este kit puede mejorar los resultados del ensayo. El aumento de la sensibilidad del ensayo, los tiempos de lavado e incubación más cortos y una alta relación señal-ruido pueden lograrse más fácilmente cuando la enzima libre está ausente del sistema. Además, la columna concentra las muestras, lo que facilita la optimización del ensayo cuando se utilizan conjugados en soluciones diluidas.