Kit de clonación de PCR TOPO™ Zero Blunt™ para secuenciación, sin células competentes

Los kits Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación proporcionan una reacción de clonación de gran eficacia en 5 minutos («clonación TOPO») para la inserción directa de productos PCR de corrección amplificados con polimerasa de extremo romo en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™4Blunt-TOPO™ con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven más secuencia de inserto y menos secuencia de vector de cada reacción. Estos kits incluyen las herramientas necesarias para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija.

• Rápido y fácil: de PCR a clones en solo 3 pasos, entre los que se incluyen una reacción de clonación de 5 minutos
• Eficaz: obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado.
• Demostrado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 20.000 citas.
• Sencillo: no se requieren ligasas, procedimientos posteriores a la PCR ni primers de PCR con secuencias específicas
• Preciso: para su uso con ADN polimerasas de alta fidelidad, sin necesidad de saliente A sobre el producto de PCR

Vector pCR™4Blunt-TOPO™: optimizado para secuenciación
El vector pCR™4Blunt-TOPO™ ha minimizado el sitio de clonación múltiple y, por tanto, hay una menor distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto (tan solo 33 pb). Así, las reacciones de secuenciación producen menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4Blunt™ TOPO tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.

Manipulación y selección de clones de pCR™4Blunt-TOPO™
El vector - TA pCR™4Blunt-TOPO™ contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar células competentes de E. coli.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones y ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4Blunt-TOPO™ no tiene salientes para una ligación eficaz de los productos PCR creados mediante la corrección de pruebas de las polimerasas termoestables que dejan productos de PCR de terminación roma.

El Kit de clonación más utilizado
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Opciones de kits: Kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación
El kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación puede ser adquirido con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:
• Clonación general: Células TOP10 (n.º de cat. K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Clonación de alta eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K2880-20, K2880-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K2895-20)
• Crecimiento rápido: E. coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K2835-20)• Suministro de sus propias células (n.º de cat. 450031 y 450159).