El kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning proporciona una estrategia de clonación en un paso, altamente eficaz y en solo 5 minutos («clonación TOPO™») para la inserción directa de productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con extremo romo amplificados con polimerasas termostables de corrección en un vector plasmídico. Cada kit tiene el vector Zero Blunt™ TOPO™ (consulte la figura) que contiene el gen ccdB para selección positiva, de forma que solo permite el crecimiento de vectores plasmídicos con recombinantes. Los kits Zero™ Blunt™ TOPO™ están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Características de los kits de Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR Cloning:

Rápido y fácil: de PCR a clones en solo tres pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación
Eficaz: obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado
Probado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas
Sencillo: no se requieren ligasas, procedimientos posteriores a la PCR ni primers de PCR con secuencias específicas.

Descripción general de los kits Zero Blunt™ TOPO™ Cloning

Vector: vector pCR™Blunt II-TOPO™: contiene el gen ccdB, que permite la selección directa de recombinantes

Método de clonación: TOPO™ Cloning: basada en la topoisomerasa I, ligación en 5 minutos de productos de PCR con extremo romo amplificados con polimerasas de corrección termoestables

Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga, competentes de rápido crecimiento o utilice las suyas propias

Vector pCR™Blunt II-TOPO™: diseñado para polimerasas de corrección
El vector de pCR™ Blunt II-TOPO™ se ha diseñado para clonar productos de PCR con extremo romo generados por polimerasas de corrección termoestables, como la ADN polimerasa Platinum™ Pfx. El vector pCR™Blunt II-TOPO™ contiene lo siguiente:

• Sitios EcoRI que flanquean el sitio de inserción del producto de la PCR para una sencilla escisión de insertos
• Diversas opciones de genes de resistencia a kanamicina y Zeocin™ en E. coli
• Sitio de primer o promotor SP6 para la transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Sitios de primers directos e inversos M13 para secuenciación o detección de PCR

Selección de clones pCR™Blunt II-TOPO™
El pCR™-Blunt II-TOPO™ permite la selección directa de recombinantes mediante la alteración del gen letal de E. coli, ccdB. El vector contiene el gen ccdB fusionado al extremo C del fragmento LacZα. La ligadura de un producto de PCR con extremo romo altera la expresión de la fusión del gel LacZα-ccdB, lo que solo permite el crecimiento de recombinantes positivos durante la transformación. Las células que contienen un vector no recombinante mueren durante la siembra en placa. Por lo tanto, no se precisa la detección azul/blanco.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™Blunt II-TOPO™ utilizado en este kit incluye el gen letal ccdB para permitir una selección eficaz de productos recombinantes de la PCR con extremo romo generados por polimerasas de corrección termoestables.

El estándar en la clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Opciones del kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™
El kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para inserción directa de productos de PCR con extremo romo en un vector plasmídico puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades

Clonación general: Células TOP10 (n.º de cat. K2800-20, K2800-40)
Clonación de alta eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K2860-01, K2860-40)
Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K2820-20, K2820-40)
Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K2830-20)
Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de cat. 450254)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de cat. K2800-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.