Kit de ensayo de longitud de cola poli(A)

Nuevo kit reconfigurado para una mayor eficiencia: El kit de ensayo de longitud de cola 76455 1 KT Poli(A) es un sustituto directo del 76450 1 KT

• Mida la cola de poli(A) de múltiples ARN en menos de 3 horas utilizando equipo de laboratorio común
• Medición precisa de longitud de cola poli(A) en comparación con otros ensayos (por ejemplo, Northern blotting)
• Un kit incluye reactivos optimizados para la formación de picos con colas de 5 G/I, 20 RT y 80 reacciones de PCR

Descripción:
La poliadenilación de los ARNm eucariotas desempeña un papel fundamental en el metabolismo del ARN, incluida la estabilidad, la traducción mejorada, la exportación nuclear y la regulación génica mediada por miARN. El kit de ensayo de longitud de cola Poli(A) le permite medir rápidamente las colas poli(A) de múltiples ARNm en solo tres horas. Este kit utiliza una novedosa técnica de extensión G/I que preserva el extremo 3' de los ARN y garantiza una medición precisa de la longitud de la cola poli(A). Además, todos los componentes de reacción se han optimizado para obtener datos de calidad rápidamente.

Descripción:
El kit de ensayo de longitud de cola de poli(A) utiliza cuatro pasos clave para permitir la determinación de longitud de cola de poli(A) (Fig. 1).

En el paso 1, la polimerasa poli(A) agrega un número limitado de residuos de guanosina e inosina a los extremos 3’ de poli(A) que contienen ARNs.

En el Paso 2, los ARNs de cola se convierten en ADN a través de la transcripción inversa utilizando las colas de G/I recién añadidas como los sitios de cebado.

En el paso 3, los productos de amplificación de PCR se generan utilizando dos juegos de cebadores. Un conjunto de cebadores de avance y retroceso específicos de genes diseñado antes del sitio de poliadenilación (por ejemplo, el 3’-UTR) se produce como un control para el gen de interés. El segundo conjunto de cebadores utiliza la imprimación directa específica del gen y la imprimación inversa universal que se suministra con el kit para generar un producto que incluye las colas poli(A) del gen de interés.

Por último, en el paso 4, los productos de PCR se separan en un gel de agarosa o poliacrilamida (Fig. 2).

Componentes del kit:
El kit contiene todos los reactivos necesarios para la formación de picos con colas de 5 G/I, 20 transcripciones inversas y 80 reacciones de PCR.

Referencias seleccionadas:
Parker, R. y Song, H. (2004) Nat struct Mol Biol. 11 121-127.
Brodersen, D.E. et al  (2008) Biochim Biophys Acta. 1779, 532-537.
Wu, L., Fan J. y Belasco, J.G. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 4034-4039.
Izaurralde, E. et al (2009) ARN 15, 21-32.
Martin, G. y Keller, W. (1998) ARN 4, 226-230.
Gauss-üMller, V. et al (2001) Nucleic Acids Res. 29 E57-7