Los gránulos magnéticos de agarosa y Ni-NTA Thermo Scientific™ Pierce™ proporcionan un método rápido y práctico para la purificación de proteínas recombinantes etiquetadas con His. Los gránulos se incuban con un lisado celular que contiene proteína marcada con His y, a continuación, se separan magnéticamente del sobrenadante de forma manual o automática si se utiliza un instrumento como el procesador de partículas magnéticas Thermo Scientific™ KingFisher™ Flex. La proteína unida de forma no específica se puede lavar con un tampón de elución antes de disociarla con His. Los instrumentos automatizados son especialmente útiles para la purificación de mayor rendimiento y la detección de condiciones de purificación.

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Las partículas magnéticas de agarosa y Ni-NTA Pierce son partículas de agarosa altamente entrecruzada con incrustaciones de magnetita y un quelador de ácido nitrilotriacético tetravalato (NTA) cargado con iones de níquel divalente. La densidad del ligando en el gránulo magnéticos de agarosa da lugar a una capacidad de unión similar o mejor que la de las resinas de agarosa tradicionales, con la el añadido de que son magnéticos. Los gránulos magnéticos de agarosa son una valiosa herramienta para la purificación a pequeña escala (∼1 mg) de múltiples proteínas etiquetadas con His y para el reconocimiento de las condiciones de expresión y purificación que se utilizan en las purificaciones a mayor escala con soportes para cromatografía de agarosa.

Características de los gránulos magnéticos de agarosa y Ni-NTA:
• Alta capacidad: suficiente para procedimientos de purificación tanto rutinarios como exigentes; une > 70 mg de proteína marcada con 6xHis por ml de resina asentada.
• Gránulos de alto rendimiento y reproducibles: los gránulos de magnetita (Fe₃O₄ ) superparamagnéticos y sin agregados proporcionan una uniformidad excepcional para aplicaciones de purificación de HTS manuales y automatizadas.
• Baja capacidad de unión no específica: un protocolo de purificación con resultados optimizados da como resultado una purificación de proteínas marcadas de mayor calidad.
• Versátil: purificación de proteínas en condiciones naturales o de desnaturalización.
• Compatible: se utiliza con reactivos de lisis celular Thermo Scientific y una gran variedad de aditivos de tampón.

Aunque la resina de agarosa superparamagnética y de alta calidad con magnetita incrustada está validada y optimizada para su uso con plataformas magnéticas de alto rendimiento, como los procesadores de partículas magnéticas KingFisher 96 y KingFisher Flex, son ideales para conseguir un rendimiento superior en aplicaciones de purificación de sobremesa sencillas si se utiliza un soporte magnético adecuado.

Las partículas magnéticas de agarosa y Ni-NTA se utilizan en la purificación por afinidad a pequeña escala, así como en la detección de alto rendimiento de proteínas recombinantes etiquetadas con His. El marcador de polihistidina es el marcador de afinidad más conocido y se compone típicamente de seis residuos consecutivos de histidina (6 x His). Las proteínas marcadas se sobreexpresan en diversos sistemas diferentes, más habitualmente en bacterias, y se purifican mediante lisados celulares tales como los obtenidos con los reactivos de extracción de proteínas bacterianas Thermo Scientific B-PER. La purificación de estas proteínas etiquetadas con His se consigue utilizando quelato de NTA cargado con níquel, que se coordina con las cadenas laterales de histidina. El quelato de NTA contiene cuatro lugares de unión de metal, lo que permite una lixiviación baja de iones metálicos y una elevada capacidad de unión. El protocolo de estos gránulos de agarosa y Ni-NTA se ha optimizado para permitir una alta pureza de las proteínas aisladas etiquetadas con His.