Los kits de expresión de proteínas humanas in vitro en un paso Thermo Scientific permiten la traducción y la modificación postranscripcional de proteínas de longitud completa a partir de plantillas de ARNm o plasmídicas con rendimientos de hasta 100 µg/ml por reacción.

Los kits de IVT humana son sistemas únicos de expresión de proteínas a base de lisados de células HeLa para la traducción in vitro o reacciones de transcripción/traducción acopladas. La expresión de la proteína se realiza en una sola reacción de 90 minutos que puede prolongarse hasta 6 horas con una producción continua de proteínas de hasta 100 µg/ml cuando se combina con el vector de expresión optimizado pT7CFE1. Los kits de IVT humana pueden expresar enzimas funcionales, fosfoproteínas, glucoproteínas y proteínas de membrana para su uso inmediato en el estudio de las interacciones de las proteínas, realizando análisis mutacionales rápidos y midiendo la actividad.

Características del kit de IVT de acoplamiento humano de un paso:

• Funcional: utiliza la maquinaria traslacional humana para expresar proteínas activas
• Fiable: realice la transcripción y traducción en un solo paso
• Alto rendimiento: incremento de las producciones con respecto a la traducción in vitro del reticulocito de conejo
• Fiable: expresa las proteínas que fallan en sistemas de reticulocitos de conejo

Mejor que los métodos tradicionales:
• Los extractos sin células HeLa son capaces de expresar proteínas con modificaciones postraslacionales
• La traducción precisa proporciona proteína de longitud completa compatible con aplicaciones posteriores
• La traducción de proteínas se optimiza con el elemento EMCV IRES y otros elementos estabilizadores de ARNm

Incluye:
• Los kits completos contienen lisado celular HeLa, proteínas accesorias, mezcla de reacción, agua sin nucleasas, vector de expresión y vector de control positivo para GFP

Requiere:
• Incubador o baño de agua a 30 °C

Aplicaciones:
• Expresar proteínas para medir la actividad enzimática
• Realizar análisis mutacional
• Expresar proteínas para su uso en ensayos de desplazamiento de movilidad en gel
• Realizar coinmunoprecipitación
• Expresar proteínas citotóxicas
• Realizar el etiquetado de aminoácidos no naturales

El kit de IVT de un paso acoplado para ADN es un sistema sin células que utiliza la transcripción celular y la maquinaria de traducción de una línea de células HeLa modificada. El procedimiento es rápido y fácil y es una alternativa eficaz a otros métodos de expresión de proteínas. Simplemente añada una expresión apropiada a una mezcla de lisado de células HeLa, proteínas accesorias, mezcla de reacción e incube a 30 °C durante 90 minutos hasta pasada la noche.

El kit de IVT humana de un paso para ARNm también utiliza la maquinaria de traducción de proteínas humanas para producir proteínas funcionales. Este kit está recomendado para la traducción de transcripciones de ARNm que contienen un elemento EMCV IRES y características estabilizadoras de ARNm diseñadas en el vector de expresión pT7CFE1.

El sistema humano de traducción in vitro es robusto y expresará proteínas de una amplia variedad de especies incluidos mamíferos, bacterias y protozoos. Las pruebas de referencia muestran que los niveles de expresión de proteínas funcionales como la luciferasa son mucho más altos en el sistema humano que en los sistemas basados en reticulocitos de conejo o en E. coli. Además, las proteínas expresadas con el sistema humano de traducción in vitro no están contaminadas con sustancias que puedan interferir con las aplicaciones posteriores.

Más datos del producto
• Protocolo para la expresión de proteínas in vitro mediante plantillas de ARNm
• Notas de aplicación de proteómica