Pierce™ Protein L Chromatography Cartridges

™™ Los cartuchos de cromatografía de proteína L Thermo Scientific Pierce son dispositivos preenvasados prácticos y listos para usar para el aislamiento y la purificación de inmunoglobulinas de las clases IgG, IgM, IgA, IgE e IgD a través de sus cadenas ligeras kappa.

La proteína L agarosa Pierce es una proteína L recombinante inmovilizada covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). Esta variedad de resina en concreto proporciona la combinación más versátil de funciones cromatográficas para aumentar el rendimiento y conseguir una purificación de alta pureza de las inmunoglobulinas diana. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

Características de la proteína L agarosa Pierce:

• Proteína L: la proteína L inmovilizada es ideal para la purificación selectiva de anticuerpos humanos y de ratón que tienen cadenas ligeras kappa.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína L mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína L agarosa Pierce tiene una carga normal de proteína L inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión de entre 5 y 10 mg de IgG de humano por ml de resina.

Los cartuchos de cromatografía Pierce son compatibles con los principales sistemas automatizados de cromatografía líquida o para el procesamiento manual de jeringas, y se acoplan directamente a los sistemas ÄKTA™ o FPLC sin conectores adicionales. Gracias a los accesorios que se incluyen con cada producto, las columnas se pueden adaptar fácilmente para su uso con accesorios de jeringa Luer-Lok o tubos de 1/16”. Los cartuchos de proteína L proporcionan separaciones cromatográficas rápidas, sencillas y reproducibles, y se pueden regenerar para múltiples usos.

Aplicaciones:
• Purifique anticuerpos monoclonales y policlonales que se unen débilmente a la proteína A o a la proteína G agarosa.
• Purifique anticuerpos monoclonales de sobrenadantes de cultivo suplementados con suero bovino.
• Lleve a cabo ensayos de inmunoprecipitación e inmunoprecipitación de proteína L.
• Purifique fragmentos de ScFv y Fab que contienen cadenas ligeras kappa.

La proteína L es una proteína de unión a inmunoglobulinas (36 kDa) que se origina en la bacteria Peptostreptococcus magnus, pero que ahora se produce de forma recombinante en E. coli. A diferencia de la proteína A y la proteína G, que se unen principalmente a través de regiones Fc (es decir, de cadena pesada) de las inmunoglobulinas, la proteína L se une a las Ig a través de las interacciones con las cadenas ligeras. Puesto que ninguna parte de la cadena pesada se ve implicada en la interacción de unión, la proteína L se une a una mayor variedad de clases de Ig que la proteína A o la G. La proteína L se une a representantes de todas las clases de Ig, incluidas IgG, IgM, IgA, IgE e IgD. Los fragmentos variables de una sola cadena (ScFv) y los fragmentos Fab también se unen a la proteína L.

A pesar de esta amplia capacidad de unión con respecto a clases de Ig, la proteína L no es una proteína de unión a inmunoglobulinas universal. La unión de la proteína L a inmunoglobulinas está restringida a aquellas que contienen cadenas ligeras kappa (es decir, cadenas kappa del dominio VL). En los humanos y los ratones, predominan las cadenas ligeras kappa. El resto de las inmunoglobulinas tienen cadenas lambda ligeras. Además, la proteína L solo es efectiva en la unión a determinados subtipos de cadenas ligeras kappa. Por ejemplo, se une a subtipos VkI, VkIII y VkIV humanos, pero no al subtipo VkII. La unión de inmunoglobulinas de ratón está restringida a aquellas que tienen cadenas ligeras VkI.

Debido a estos requisitos concretos para la unión eficaz, la principal aplicación para la proteína L inmovilizada es la purificación de anticuerpos monoclonales de ascitis o sobrenadante de cultivo que se sabe que tienen la cadena ligera kappa. La proteína L resulta extremadamente útil para la purificación de anticuerpos monoclonales que contienen VLk de los sobrenadantes de cultivo porque no se une a inmunoglobulinas bovinas