Alexa Fluor™ 532 es un colorante fluorescente amarillo brillante con una excitación adaptada idealmente para la línea de láser de Nd-YAG de doble frecuencia. El tinte Alexa Fluor™ 532, empleado para la generación estable de señales para la obtención de imágenes en citometría de flujo, es soluble en agua e insensible al pH entre pH 4 y pH 10. Además de las formulaciones de colorante reactivo, ofrecemos el colorante Alexa Fluor™ 532 conjugado con una serie de anticuerpos, péptidos, proteínas, trazadores y sustratos de amplificación optimizados para el etiquetado y la detección celular (más información).

El derivado de la maleimida de Alexa Fluor™ 532 es la herramienta más popular para conjugar el colorante con un grupo tiol en una proteína, oligonucleótido tiofosfato o ligando de bajo peso molecular. Los conjugados Alexa Fluor™ 532 resultantes presentan una fluorescencia más brillante y una mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares.

Información detallada sobre esta maleimida AlexaFluor™

Etiqueta de fluoróforo: Colorante Alexa Fluor™ 532
Grupo reactivo: maleimida
Reactividad: grupos tiol en proteínas y ligandos, oligonucleótidos tiofosforados
Excitación / emisiones del conjugado: 528/552 nm
Coeficiente de extinción: 78.000 cm-1 m-1
Peso molecular: 812,88

Reacción de conjugación típica
La proteína debe disolverse en una concentración de entre 50 y 100 µM en un tampón adecuado (de 10 a 100 mM de fosfato, Tris o HEPES) con un pH de 7,0 a 7,5. En este intervalo de pH, los grupos tiol de la proteína son lo suficientemente nucleófilos para reaccionar casi exclusivamente con el reactivo en presencia de los más numerosos grupos amino de la proteína, que están protonados y son relativamente no reactivos. Se recomienda reducir los enlaces de disulfuro en este punto mediante un agente de reductor 10 veces en exceso molar, como DTT o TCEP. El exceso de DTT debe eliminarse por diálisis y la posterior modificación de tiol debe efectuarse sin presencia de oxígeno para evitar que los enlaces de disulfuro se vuelvan a formar; estas precauciones no son necesarias si se utiliza TCEP antes de la conjugación de maleimida.

La maleimida Alexa Fluor™ suele disolverse en dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro en una concentración de 1 a 10 mm inmediatamente antes de su uso. Las soluciones madre deben protegerse de la luz en la medida de lo posible. Generalmente, esta solución madre se agrega a la solución de proteína gota a gota mientras se agita para producir aproximadamente de 10 a 20 moles de reactivo por mol de proteína, y la reacción puede proseguir a temperatura ambiente durante 2 horas o a 4 °C durante la noche, protegida de la luz. Cualquier reactivo al tiol que no haya reaccionado puede consumirse si se añade un exceso de glutatión, mercaptoetanol tiol de peso molecular bajo soluble.

Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del colorante Alexa Fluor™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para cantidades mucho mayores o menores de proteínas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 µg (A33087)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 µg (A33088)

Más información sobre el etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de marcado, lea la sección 1.2 sobrekits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos del manual de Molecular Probes™.

Creamos conjugados personalizados
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee. Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.