Invitrogen™

Kit de expresión de proteínas funcionales MembranePro™

Para los clientes que estudian RCPG y otras proteínas de membrana, MembranePro™ es el sistema listo para usar que suministraMás información

Número de catálogo	Cantidad
A11667	1 Kit

Número de catálogo A11667

Precio (USD)

Cantidad:

1 Kit

Para los clientes que estudian RCPG y otras proteínas de membrana, MembranePro™ es el sistema listo para usar que suministra proteínas de membrana enriquecidas y funcionales de forma eficiente y fiable. Las ventajas de MembranePro™ incluyen:

• Las proteínas se muestran en las membranas celulares humanas (o de otros mamíferos)
• El control de calidad celular y el procesamiento postraslacional de mamíferos ayudan a producir proteínas funcionales
• Las proteínas brotan como lipopartículas y se recogen fácilmente del medio del cultivo
• Las lipopartículas se enriquecen con receptores expresados

El flujo de trabajo MembranePro™ es menos laborioso en comparación con la producción tradicional de fracciones de membrana. En resumen, el protocolo MembranePro™ le permite:

1. Clone su gen de interés usando un vector TOPO™
2. Transfecte con Lipofectamine™ 2000 y el reactivo MembranePro™ en células 293FT
3. Coseche lipopartículas 48 h postransfección, concentre con la mezcla de precipitación MembranePro™
4. Almacene lipoartículas a - 80 ºC o proceda con ensayos posteriores

Los productos MembranePro™ se ofrecen en dos configuraciones: como kits de expresión (vector TOPO™, Lipofectamine™ 2000, mezcla de precipitación MembranePro™, reactivo MembranePro™, células 293FT) y como kits de soporte (Lipofectamine™ 2000, mezcla de precipitación MembranePro™, reactivo Membrane Pro™). El kit de expresión solo está disponible en un tamaño de reacción de 10; el kit de soporte está disponible en tamaños de reacción de 10, 60 y 600.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Línea de células293FT

Tipo de entregaPartículas similares a virus (VLP)

Tipo de proteína expresadaProteína de membrana

Mecanismo de expresiónExpresión basada en células

Para utilizar con (aplicación)Expresión de proteínas de membrana

Compatibilidad de alto rendimientoCompatible con alto rendimiento

Línea de productosMembranePro

Cantidad1 Kit

Agente de selección (eucariótico)Blasticidina

Marcador de selección eucariotaBsdR

Sistema de expresiónMamífero

PromotorEF-1α

TipoMembranePro Functional Protein Expression Kit

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

El kit contiene:
•pEF6 V5-His TOPO™ TA Vector Kit para al menos 10 reacciones de clonación TOPO™ (almacenar a -20 °C)
•3 x 10^6 células 293FT (almacenar en nitrógeno líquido)
•1 x 75 ml de mezcla de precipitación MembranePro™ (almacenar a temperatura ambiente)
•1 x 0,3 mg (1 m⁄gml) de reactivo MembranePro™ (almacenar a -20 °C)
•3 x 0,75 ml de Lipofectamine™ 2000 (almacenar a + 4 °C)
•Manuales

Preguntas frecuentes

I had a problem growing up the 293T cells provided in the MembranePro Functional Protein Expression Kit. Can I use a different cell line?

While other cell lines can be tested, we recommend using the supplied 293FT cells, as the performance of the kit has been optimized for use with this cell line (i.e., transfection efficiency).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

Your MembranePro Functional Protein Expression Kit/Expi293 MembranePro Expression System does not include a positive control. How do I tell if MembranePro particles were formed?

You can visually tell if MembranePro particles formed via a pellet at the bottom of the tube following precipitation. You can also test the function of your MembranePro particles via receptor-ligand binding studies.

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A GPCR has 2 polypeptides - a ligand-binding polypeptide (receptor chain) and the G-protein (signal transduction chain). Can I use a G-protein coupling receptor (RG-form) specific ligand as a tracer?

If a ligand-binding chain is transfected alone, there may not be coupling of G-protein. We have demonstrated agonist ligand binding to 5HT1a and muscarinic M1 receptors captured on MembranePro particles. Different agonists compete ligand off both muscarinic and 5HT1a receptors in MembranePro particles, and they do so in order of affinity, indicating physiologically relevant interaction with the receptors on MembranePro particles. In direct binding studies, agonist binds in the low-affinity form (higher Kd), indicating little or no G-protein is coupled to the receptor. However, the binding is still specific and competitive. You may see increased binding by coexpressing the cognate G-protein.

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What is the size range of proteins produced with the MembranePro Functional Protein Expression Kit and the Expi293 MembranePro Expression System?

The GPCRs we produced and tested are approximately 50 kDa. In theory, there is no limit on the size of the extracellular or transmembrane domains. However, there may be packaging issues if the C-terminal domain is too large.

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Does the expression vector in the MembranePro Functional Protein Expression Kit offer a His tag?

The MembranePro Functional Protein Expression System is optimized for use with the pEF6 vector. However, cloning your gene into the pEF6/V5-His-TOPO vector without a stop codon and in frame with the polylinker will result in a fusion protein with V5 and polyhistidine (6×His) tags on the C-terminus of your protein. As the C-terminus of your transmembrane protein will likely be inside the VLP, these tags will be inaccessible to purification resins and antibodies. In theory, these tags could be used to identify and isolate a fusion membrane protein after denaturing the VLP; however, the MembranePro Functional Protein Expression System does not support using the tags for extraction and purification.

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