GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System

El sistema de mutagénesis dirigida GeneArt™ proporciona unos novedosos medios sencillos, cómodos y muy eficaces para generar mutaciones en una construcción objetivo in vitro en menos de tres horas. Este sistema sustituye al popular sistema de mutagénesis dirigida GeneTailor™ y se ha rediseñado por completo para estar al frente de los productos comerciales de mutagénesis dirigida disponibles actualmente en el mercado. Este producto lleva nuestra tecnología de mutagénesis al siguiente nivel. Nota: no se incluye ninguna enzima de PCR en el sistema y deberá adquirirse por separado. La enzima recomendada para este kit es la ADN polimerasa AccuPrime™ Pfx.

• Potente: realice sustituciones, eliminaciones o inserciones de hasta 12 nucleótidos en plásmidos de hasta 14 kb
• Eficaz: le permiten obtener su mutante deseado la primera vez; más del 90 % de mutantes correctos en un plásmido de 3 kb
• Rápido: tenga su ADN plasmídico mutado en menos de tres horas con el sencillo protocolo de manejo mínimo
• Versátil: permite usar plásmidos de muchos tamaños, así como ADN aislado de cualquier fuente sin necesidad de vectores especializados, cepas huésped o sitios de restricción

Creación sencilla de mutantes deseados
La creación de mutantes mediante el sistema de mutagénesis dirigida GeneArt™ depende de las propiedades inherentes de ADN metilasa, ADN polimerasa de alta fidelidad, enzimas de recombinación y la endonucleasa McrBC nativa de E. coli. Basta incorporar la mutación o mutaciones (hasta 12 nucleótidos) que desea en los primers y, después de la recombinación de PCR y la transformación, obtendrá solo los vectores con las mutaciones que desee con una eficacia de hasta el 90 %. El vector de plantilla al que añade las mutaciones se puede aislar a partir de cualquier fuente y hasta 14 Kb de tamaño. Para crear construcciones completas, o para unir piezas grandes de ADN no relacionado, consulte el kit de montaje y clonación GeneArt™ Seamless (n.º de referencia A13288) o el sistema de montaje genético de orden superior GeneArt™ (n.º de referencia A13286).

Protocolo de mutagénesis optimizado
El sistema de mutagénesis dirigido GeneArt™ se ha optimizado para aumentar la eficacia y la simplicidad. Los pasos de amplificación y metilación del ADN se combinan en una única reacción sin necesidad de un paso de digestión de Dpnl in vitro. Después de la metilación y la amplificación, una reacción de recombinación in vitro de 10 minutos de los productos de PCR amplificados aumenta la producción de colonias de 3 a 10 veces, lo que se traduce en una mayor eficacia de la mutagénesis. Una transformación final del ADN mutado en células DH5α™ E.coli digiere cualquier ADN paterno metilado y deja únicamente el producto de la reacción de la mutagénesis no metilada intacto. No son necesarios pasos de purificación ni digestiones adicionales. Las colonias individuales se pueden seleccionar al día siguiente para verificar las mutaciones.