Kit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Amplex™ Red

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Invitrogen™

Kit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Amplex™ Red

El kit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Amplex™ Red contiene un ensayo sensible de un paso que utiliza elMás información

Número de catálogo	Cantidad
A22188	500 ensayos

Número de catálogo A22188

Precio (USD)

616,86

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Cantidad:

500 ensayos

Precio (USD)

616,86

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El kit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Amplex™ Red contiene un ensayo sensible de un paso que utiliza el reactivo Amplex™ Red (10-acetil-3,7-dihidroxifenoxacina) para detectar la actividad de peroxidasa o peróxido de hidrógeno (H₂O₂). El reactivo Amplex™ Red, en combinación con la peroxidasa de rábano (HRP), se ha utilizado para detectar el H₂O₂ liberado de las muestras biológicas (incluidas células) o generado en reactivos acoplados con enzimas. Además, el reactivo Amplex™ Red se puede utilizar como ensayo ultrasensible de la actividad de la peroxidasa cuando hay un exceso de H₂O₂. En presencia de la peroxidasa, el reactivo Amplex™ Red reacciona con H₂O₂ en una estoiquiometría 1:1 para crear un producto de oxidación rojo fluorescente, la resorufina. La resorufina tiene unos niveles máximos aproximados de excitación y emisión de 571 nm y 585 nm, respectivamente. Dado que el coeficiente de extinción es alto (58.000 ± 5000 cm–¹M–¹), puede realizar el ensayo mediante fluorimetría o espectrofotometría. Esta reacción se ha utilizado para detectar un mínimo de 10 picomoles de H₂O₂ en un volumen de 100 µl o en 1 x 10–5 U/ml de HRP.

Especificaciones del kit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Amplex™ Red:
• Ex/Em de resorufina de productos de reacción: ∼571/585 nm
• Ensayo sensible de un paso para detectar peroxidasa y peróxido de hidrógeno in vitro
• Puede detectar un mínimo de 10 picomoles de peróxido de hidrógeno o de 10 µU/ml de actividad de peroxidasa de rábano en un volumen de ensayo de 100 µl
• Proporciona suficiente reactivo para aproximadamente 500 ensayos con volúmenes de reacción de 100 µl por ensayo
• Diseñado para un lector de microplacas de absorbencia o fluorescencia de 96 pocillos, pero se puede adaptar fácilmente para otros volúmenes, fluorímetros y espectrofotómetros

Busque más sustratos para oxidasas
Consulte Substrates for Oxidases, Including Amplex Red Kits—Section 10.5 (Sustratos para oxidasas, incluidos kits Amplex Red, sección 10.5) en el manual de Molecular Probes™ para obtener más información sobre estos productos.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso diagnóstico o terapéutico en humanos ni en animales.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Método de detecciónFluorescente

Tipo de coloranteOtras etiquetas o colorantes

FormatoTubos, placa de 96 pocillos

Cantidad500 ensayos

Condiciones de envíoTemperatura ambiente

Para utilizar con (aplicación)Ensayo de peróxido de hidrógeno/peroxidasa

Para utilizar con (equipo)Lector de microplacas, Espectrofotómetro, Fluorímetro

Línea de productosAmplex

Tipo de productoKit de ensayo de peroxidasa/peróxido de hidrógeno Red

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

Almacenar en el congelador de -5 °C a -30 °C y proteger de la luz.

Preguntas frecuentes

I'm using an Amplex Red kit, the reagent changes color to pink almost immediately in my own Krebs-Ringer buffer but not in HBSS. Why is this?

The components of Krebs-Ringer buffer (salts) should not cause oxidation of the Amplex reagent (which, in the presence of peroxidase and H₂O₂ oxidizes to resorufin, which is pink in color and fluorescent). Try water alone (the water used to make the Krebs-Ringer buffer). Since Hank's Buffered Saline Solution is typically purchased rather than made in the lab, it likely would not have the same contaminant. Another option is to degas the buffer prior to use to removed dissolved oxygen radicals.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can I use the Amplex Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit (Cat. No. A22188) to measure H2O2 from frozen cell culture supernatant?

We recommend using fresh samples that have not been frozen since H2O2 degrades over time and more readily in diluted form or in solutions that contain metal ions or natural antioxidants. For assaying cell culture supernatant, we would recommend analyzing samples as soon as possible.

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Can Amplex Red Assays be performed using cell lysates?

This is not recommended. The presence of endogenous proteases can complicate the assay by degrading the horseradish peroxidase (HRP). Endogenous peroxidases and antioxidants can modify the H₂O₂ required for the reaction, competing with HRP (and catalase) for the substrate.

The Amplex Red Assays are best performed with either purified enzymes or extracted H₂O₂ in a defined buffer system, extracellular solutions or body fluids (media, serum, etc.) that do not exhibit high levels of endogenous protease or oxidase activity and do not contain antioxidants.

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Citations & References (62)

Citations & References

Abstract

Roles for the human ATP-dependent Lon protease in mitochondrial DNA maintenance.

Authors:Lu B,Yadav S,Shah PG,Liu T,Tian B,Pukszta S,Villaluna N,Kutejová E,Newlon CS,Santos JH,Suzuki CK

Journal:The Journal of biological chemistry

PubMed ID:17420247

Similar transition states mediate the Q-cycle and superoxide production by the cytochrome bc1 complex.

Authors:Forquer I,Covian R,Bowman MK,Trumpower BL,Kramer DM

Journal:The Journal of biological chemistry

PubMed ID:17008316

Overexpression of Na(+)/K (+)-ATPase parallels the increase in sodium transport and potassium recycling in an in vitro model of proximal tubule cellular ageing.

Authors:Silva E, Gomes P, Soares-da-Silva P,

Journal:J Membr Biol

PubMed ID:17334838

'Na(+)/K(+)-ATPase plays a key role in the transport of Na(+) throughout the nephron, but ageing appears to be accompanied by changes in the regulation and localization of the pump. In the present study, we examined the effect of in vitro cell ageing on the transport of Na(+) and K(+) ions ... More

Reactive oxygen species production via NADPH oxidase mediates TGF-beta-induced cytoskeletal alterations in endothelial cells.

Authors:Hu T, Ramachandrarao SP, Siva S, Valancius C, Zhu Y, Mahadev K, Toh I, Goldstein BJ, Woolkalis M, Sharma K

Journal:Am J Physiol Renal Physiol

PubMed ID:16159901

'Cytoskeletal alterations in endothelial cells have been linked to nitric oxide generation and cell-cell interactions. Transforming growth factor (TGF)-beta has been described to affect cytoskeletal rearrangement in numerous cell types; however, the underlying pathway is unclear. In the present study, we found that human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) have ... More

Subcellular localization of Nox4 and regulation in diabetes.

Authors:Block K, Gorin Y, Abboud HE,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:19706525

'Oxidative stress is implicated in human diseases. Some of the oxidative pathways are harbored in the mitochondria. NAD(P)H oxidases have been identified not only in phagocytic but also in somatic cells. Nox4 is the most ubiquitous of these oxidases and is a major source of reactive oxygen species (ROS) in ... More

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