Kit de síntesis de ADNc de miARN TaqMan™ Advanced

El kit avanzado de síntesis de miARN a ADNc Applied Biosystems™ TaqMan™ utiliza una composición química universal de transcripción inversa (RT) para preparar la plantilla de ADNc que se utilizará con los ensayos avanzados de miARN TaqMan™ para la detección y cuantificación de miARN humanos maduros en muestras biológicas.

El kit avanzado de síntesis de miARN a ADNc TaqMan utiliza la formación de picos con colas de poli-A en el extremo 3' y la ligación en el extremo 5' de una secuencia de un adaptador para extender por cada extremo los miARN maduros presentes en la muestra antes de la transcripción inversa. Los cebadores universales de RT reconocen las secuencias universales presentes en los extremos ampliados 5' y 3' de los miARN maduros. Todos los miARN maduros de la muestra se transcriben inversamente en ADNc.

A fin de mejorar la detección de los objetivos de miARN de baja expresión, el ADNc se amplifica mediante los cebadores miR-Amp universales y la mezcla maestra miR-Amp para aumentar de forma uniforme la cantidad de ADNc en cada objetivo y, así, mantener los niveles relativos de expresión diferencial. A diferencia de la amplificación previa tradicional, los cebadores miR-Amp universales reconocen las secuencias universales que se añaden a los extremos 5' y 3' de todos los miARN maduros, lo que garantiza la ausencia de un sesgo de amplificación.

• Sensibilidad: la alta sensibilidad permite la cuantificación de objetivos de miARN de baja expresión, especialmente en fluidos biológicos como el plasma, el suero y el tejido.
• Flexibilidad: la composición química universal de RT genera plantillas de ADNc universales para todos los miARN presentes en la muestra, lo que aumenta la flexibilidad a la hora de diseñar el estudio.
• Ahorro de muestras: con una muestra de 2 μl de plasma o suero genera suficiente ADNc para 600 reacciones de qPCR (20 μl) o 1200 reacciones de qPCR (10 μl).
• Especificidad: el paso de ligación en el extremo 5' permite discriminar un solo par de base en toda la secuencia de miARN, incluidas las discordancias difíciles de detectar en el extremo 5''
• Composición química TaqMan de referencia: este kit está diseñado para su uso con los ensayos avanzados de miARN TaqMan™ para qPCR, que aprovechan el proceso de diseño de ensayos de bioinformática y el sistema de validación de Thermo Fisher Scientific líderes del sector para garantizar una alta especificidad y una reactividad cruzada mínima, incluso para tipos de miARN estrechamente relacionados.