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Citas y referencias (5)
Invitrogen™
Alexa Fluor™ 350 C5 Maleimide
Alexa Fluor™ 350 es un colorante fluorescente azul con una fotoestabilidad y una excitación moderadas que se ajustan a laMás información
| Número de catálogo | Cantidad |
|---|---|
| A30505 | 1 mg |
Número de catálogo A30505
Precio (USD)
-
Cantidad:
1 mg
Alexa Fluor™ 350 es un colorante fluorescente azul con una fotoestabilidad y una excitación moderadas que se ajustan a la línea de láser de 350 nm. El tinte Alexa Fluor™ 350, empleado para la generación estable de señales para la obtención de imágenes en citometría de flujo, es soluble en agua e insensible al pH entre pH 4 y pH 10. Además de las formulaciones de colorante reactivo, ofrecemos el colorante Alexa Fluor™ 350 conjugado con una serie de anticuerpos, péptidos, proteínas, marcadores y sustratos de amplificación optimizados para el etiquetado y la detección celular (más información).
El derivado de la maleimida de Alexa Fluor™ 350 es la herramienta más popular para conjugar el colorante con un grupo tiol en una proteína, oligonucleótido tiofosfato o ligando de bajo peso molecular. Los conjugados Alexa Fluor™ 350 resultantes presentan una fluorescencia más brillante y una mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares.
Información detallada sobre esta maleimida AlexaFluor™
Etiqueta de fluoróforo: Colorante Alexa Fluor™ 350
Grupo reactivo: maleimida
Reactividad: grupos tiol en proteínas y ligandos, oligonucleótidos tiofosforados
Excitación/emisiones del conjugado: 345/444 nm
Coeficiente de extinción: 17.000 cm-1 m-1
Colorantes similares espectrales: Marina Blue
Peso molecular: 578,68
Reacción de conjugación habitual
La proteína debe disolverse en una concentración de entre 50 y 100 µM en un tampón adecuado (de 10 a 100 mM de fosfato, Tris o HEPES) con un pH de 7,0 a 7,5. En este intervalo de pH, los grupos tiol de la proteína son lo suficientemente nucleófilos para reaccionar casi exclusivamente con el reactivo en presencia de los más numerosos grupos amino de la proteína, que están protonados y son relativamente no reactivos. Se recomienda reducir los enlaces de disulfuro en este punto mediante un agente de reductor 10 veces en exceso molar, como DTT o TCEP. El exceso de DTT debe eliminarse por diálisis y la posterior modificación de tiol debe efectuarse sin presencia de oxígeno para evitar que los enlaces de disulfuro se vuelvan a formar; estas precauciones no son necesarias si se utiliza TCEP antes de la conjugación de maleimida.
La maleimida Alexa Fluor™ suele disolverse en dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro en una concentración de 1 a 10 mm inmediatamente antes de su uso. Las soluciones madre deben protegerse de la luz en la medida de lo posible. Generalmente, esta solución madre se agrega a la solución de proteína gota a gota mientras se agita para producir aproximadamente de 10 a 20 moles de reactivo por mol de proteína, y la reacción puede proseguir a temperatura ambiente durante 2 horas o a 4 °C durante la noche, protegida de la luz. Cualquier reactivo al tiol que no haya reaccionado puede consumirse si se añade un exceso de glutatión, mercaptoetanol tiol de peso molecular bajo soluble.
Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del colorante Alexa Fluor™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para cantidades mucho mayores o menores de proteínas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 µg (A33087)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 µg (A33088)
Más información sobre el etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de marcado, lea la sección 1.2 sobrekits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos del manual de Molecular Probes™.
Creamos conjugados personalizados
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee. Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.
El derivado de la maleimida de Alexa Fluor™ 350 es la herramienta más popular para conjugar el colorante con un grupo tiol en una proteína, oligonucleótido tiofosfato o ligando de bajo peso molecular. Los conjugados Alexa Fluor™ 350 resultantes presentan una fluorescencia más brillante y una mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares.
Información detallada sobre esta maleimida AlexaFluor™
Etiqueta de fluoróforo: Colorante Alexa Fluor™ 350
Grupo reactivo: maleimida
Reactividad: grupos tiol en proteínas y ligandos, oligonucleótidos tiofosforados
Excitación/emisiones del conjugado: 345/444 nm
Coeficiente de extinción: 17.000 cm-1 m-1
Colorantes similares espectrales: Marina Blue
Peso molecular: 578,68
Reacción de conjugación habitual
La proteína debe disolverse en una concentración de entre 50 y 100 µM en un tampón adecuado (de 10 a 100 mM de fosfato, Tris o HEPES) con un pH de 7,0 a 7,5. En este intervalo de pH, los grupos tiol de la proteína son lo suficientemente nucleófilos para reaccionar casi exclusivamente con el reactivo en presencia de los más numerosos grupos amino de la proteína, que están protonados y son relativamente no reactivos. Se recomienda reducir los enlaces de disulfuro en este punto mediante un agente de reductor 10 veces en exceso molar, como DTT o TCEP. El exceso de DTT debe eliminarse por diálisis y la posterior modificación de tiol debe efectuarse sin presencia de oxígeno para evitar que los enlaces de disulfuro se vuelvan a formar; estas precauciones no son necesarias si se utiliza TCEP antes de la conjugación de maleimida.
La maleimida Alexa Fluor™ suele disolverse en dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro en una concentración de 1 a 10 mm inmediatamente antes de su uso. Las soluciones madre deben protegerse de la luz en la medida de lo posible. Generalmente, esta solución madre se agrega a la solución de proteína gota a gota mientras se agita para producir aproximadamente de 10 a 20 moles de reactivo por mol de proteína, y la reacción puede proseguir a temperatura ambiente durante 2 horas o a 4 °C durante la noche, protegida de la luz. Cualquier reactivo al tiol que no haya reaccionado puede consumirse si se añade un exceso de glutatión, mercaptoetanol tiol de peso molecular bajo soluble.
Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del colorante Alexa Fluor™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para cantidades mucho mayores o menores de proteínas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 µg (A33087)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 µg (A33088)
Más información sobre el etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de marcado, lea la sección 1.2 sobrekits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos del manual de Molecular Probes™.
Creamos conjugados personalizados
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee. Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Reactividad químicaTiol
Emisión444 nm
Excitación345 nm
Etiqueta o tinteAlexa Fluor™ 350
Tipo de productoTinte
Cantidad1 mg
Fracción reactivaMaleimida
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Tipo de etiquetaColorantes Alexa Fluor
Línea de productosAlexa Fluor
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Almacenar en el congelador (de – 5 a – 30 °C) y proteger de la luz.
Preguntas frecuentes
What are the signal intensity differences between Alexa Fluor 350 dye and Alexa Fluor 488 dye?
Citations & References (5)
Citations & References
Abstract
The structure of calreticulin C-terminal domain is modulated by physiological variations of calcium concentration.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:20018892
Calreticulin is an abundant endoplasmic reticulum resident protein that fulfills at least two basic functions. Firstly, due to its ability to bind monoglucosylated high mannose oligosaccharides, calreticulin is a central component of the folding quality control system of glycoproteins. On the other hand, thanks to its capacity to bind high
A method for site-specific labeling of multiple protein thiols.
Journal:Protein Sci
PubMed ID:19388048
'We present a generic method for the site-specific and differential labeling of multiple cysteine residues in one protein. Phenyl arsenic oxide has been employed as a protecting group of two closely spaced thiols, allowing first labeling of a single thiol. Subsequently, the protecting group is removed, making available a reactive
Domains II and III of Bacillus thuringiensis Cry1Ab toxin remain exposed to the solvent after insertion of part of domain I into the membrane.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:21464133
Bacillus thuringiensis produces insecticidal proteins named Cry toxins, that are used commercially for the control of economical important insect pests. These are pore-forming toxins that interact with different receptors in the insect gut, forming pores in the apical membrane causing cell burst and insect death. Elucidation of the structure of
An eight residue fragment of an acyl carrier protein suffices for post-translational introduction of fluorescent pantetheinyl arms in protein modification in vitro and in vivo.
Journal:J Am Chem Soc
PubMed ID:18593165
Genetically encoded tags for tracking a given protein continue to be of great interest in a multitude of in vitro and in vivo contexts. Acyl carrier proteins, both free-standing and as embedded 80-100 residue domains, contain a specific serine side chain that undergoes post-translational pantetheinylation from CoASH as donor substrate.
Efficiencies of fluorescence resonance energy transfer and contact-mediated quenching in oligonucleotide probes.
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:12409481
An important consideration in the design of oligonucleotide probes for homogeneous hybridization assays is the efficiency of energy transfer between the fluorophore and quencher used to label the probes. We have determined the efficiency of energy transfer for a large number of combinations of commonly used fluorophores and quenchers. We