Reactivos y kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High Select™
Reactivos y kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High Select™
Thermo Scientific™

Reactivos y kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High Select™

La familia ampliada High-Select de kits completos admite el enriquecimiento de péptidos fosforilados mediante resinas inmovilizadas Fe-NTA y TiO2 en formatos de columna de centrifugación, punta y partículas magnéticas diseñados para su uso con análisis de MS.
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Número de catálogoCantidadTipo de producto
A3299324 reaccionesKit de enriquecimiento de fosfopéptidos
A3299230 reaccionesKit de enriquecimiento de fosfopéptidos
8830230 columnasColumna
8830396 puntasSpin Tip de enriquecimiento de fosfopéptidos
Número de catálogo A32993
Precio (USD)
1.097,10
Each
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Cantidad:
24 reacciones
Tipo de producto:
Kit de enriquecimiento de fosfopéptidos
Precio (USD)
1.097,10
Each
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La espectrometría de masas (MS) es una herramienta clave para identificar sitios de fosforilación de proteínas y cuantificar los cambios de fosforilación. Sin embargo, el análisis de MS de la fosforilación de proteínas es problemático debido a la baja estequiometría, la alta hidrofilicidad, la escasa ionización y la fragmentación incompleta de los fosfopéptidos. Debido a la baja abundancia relativa de modificaciones de fosforilación en muestras de proteínas complejas, el enriquecimiento es esencial para el análisis exitoso de MS de fosfopéptidos. Los kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High-Select Fe-NTA y TiO2 complementan nuestros reactivos de lisis, reducción, alquilación y digestión, junto con nuestras columnas de centrifugación de fraccionamiento de péptidos de fase reversa C18, de grafito y de pH alto para proporcionar un flujo de trabajo completo para el enriquecimiento de fosfopéptidos.
Práctico:—tampones preformulados para facilidad de uso en columna de centrifugación (Fe-NTA y TiO2) o formatos magnéticos (Fe-NTA) para permitir el procesamiento paralelo de varias muestras
Alta especificidad: recupera fosfopéptidos con > 90 % de selectividad
Recuperación superior: enriquece más fosfopéptidos totales y únicos que otras resinas disponibles en el mercado
Alta cobertura: recupera péptidos con sitios de fosforilación únicos y múltiples
Ampliable: —compatible con la automatización, incluido el uso de procesadores de partículas magnéticas KingFisher

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos de HFe-NTA de alta selección enriquece fosfopéptidos de muestras complejas utilizando resina de quelato de hierro en columnas de centrifugación. Cada columna puede enriquecer fosfopéptidos de 0,5 a 5 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial. Junto con tampones preformulados, el procedimiento mejorado y simplificado enriquece hasta 150 µg de fosfoléptidos con una selectividad superior al 90 % en menos de 45 minutos.

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos de alta selección TiO2 incluye 24 puntas de centrifugación de dióxido de titanio (TiO2) con tampones optimizados para facilitar la preparación de fosfopéptidos enriquecidos. Cada columna puede enriquecer fosfopéptidos de 0,5 a 3 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial. Los tampones optimizados y el procedimiento simplificado eliminan la necesidad de pirrolidina en el tampón de elución y la posterior limpieza mediante columnas de centrifugación de grafito. El uso de este kit produce un enriquecimiento de hasta 150 µg de fosfolopéptidos con una selectividad superior al 90 %. TiO2 enriquece un conjunto único de fosfopéptidos que complementa el kit de enriquecimiento con fosfopéptidos High-Select Fe-NTA IMAC.

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos magnéticos High-Select Fe-NTA enriquece los fosfoléptidos de muestras complejas mediante partículas de agarosa magnética de quelato de hierro. Cada reacción es suficiente para enriquecer 250–1000 µg de fosfopéptidos a partir de 0,5–5 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial en menos de 45 minutos. Además, el kit también se puede utilizar para enriquecer péptidos modificados químicamente con grupos funcionales diseñados para su uso con resinas de cromatografía de afinidad de metales inmovilizadas.

La agarosa magnética de Fe-NTA High-Select se ha diseñado específicamente para enriquecer fosfoléptidos y péptidos modificados químicamente para el análisis de MS. Nuestras partículas superparamagnéticas no agregantes, magnetita (Fe3O4), tienen una uniformidad excepcional para un alto rendimiento mediante aplicaciones de purificación manuales y automatizadas. La agarosa magnética de Fe-NTA está disponible por separado para proporcionar flexibilidad en el diseño experimental.

Para el análisis de alta resolución de fosfopéptidos enriquecidos, la columna LC recomendada para la fuente Nanospray Flex es la columna LC Acclaim PepMap 100 C18 (n.º de cat. 164942 o 164939). Para la fuente EASY-Spray, la columna LC recomendada es la columna de LC Easy-Spray C18 (N.º de ES902 o ES903). Las partículas de agarosa magnética High-Select Fe-NTA independientes proporcionan flexibilidad para la escala y el rendimiento y se pueden utilizar en plataformas manuales y automatizadas, incluidos los procesadores de partículas magnéticas Kingfisher 96 y Kingfisher Flex.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
Tipo de producto finalpéptidos
Para utilizar con (equipo)Microcentrífuga
Etiqueta o tinteSin marcar
Cantidad24 reacciones
Condiciones de envíoHielo húmedo
Paso del flujo de trabajoEnriquecimiento de péptidos
Método de detecciónEspectrometría de masas
FormatoKit
Línea de productosHigh Select
Tipo de productoKit de enriquecimiento de fosfopéptidos
Material de partidaProteína digerida por proteasa
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• Puntas giratorias de TiO2 (24)
• Adaptadores de columna de centrifugación (24)
• Tampón de unión/equilibrio (7 ml)
• Tampón de lavado (1,8 ml)
• Tampón de elución de fosfopéptidos (7 ml)

Preguntas frecuentes

Should I desalt my peptide samples before enrichment using the High Select Phosphopeptide Enrichment Kits?

Yes, we do recommend desalting peptide samples before enrichment when using High-Select Fe-NTA and TiO2 phosphopeptide enrichment kits. This helps ensure optimal results by removing detergents and salts that can interfere with the enrichment process.

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In the SMOAC protocol (https://www.thermofisher.com/blog/learning-at-the-bench/wp-content/uploads/sites/13/2024/10/High-SelectTM-SMOAC-Protocol.pdf), can I enrich with High-Select Fe-NTA kit first?

No. It is important to enrich with the TiO2 kit (Cat. No. A32993) first. Afterwards, the flow-through and wash fractions from this enrichment can be processed with the Fe-NTA kit (Cat. No. A32992). If this order is reversed (that is, Fe-NTA before TiO2), there will be 2 consequences as follows: 1. There will not be any significant additional recovery of peptides (maybe just a few more peptides). 2. There will be no enrichment for the multiple phosphorylated peptides, so those would be lost.

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Why do you offer two phosphopeptide enrichment kits: the High-Select TiO2 kit (Cat. No. A32993) and the High-Select Fe-NTA kit (Cat. No. A32993)?

The two phosphopeptides enrichment kits, Fe-NTA and TiO2, enrich a complementary set of phosphopeptides. Our R&D has developed a Sequential enrichment of Metal Oxide Affinity Chromatography (see https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CMD/posters/PO-65032-SMOAC-Phosphoproteomics-Peptides-ASMS2017-PO65032-EN.pdf and https://www.thermofisher.com/blog/learning-at-the-bench/wp-content/uploads/sites/13/2024/10/High-SelectTM-SMOAC-Protocol.pdf?CID=bid_mic_r04_jp_cp0000_pjt0000_bid00000_0so_blg_protein_analysis_mass_spectrometry_bid_ts_mbr_24065_Social_LAB) where flow-through and wash fractions from TiO2 enrichment were combined and subjected to Fe-NTA enrichment. This sequential enrichment provides impressive coverage of phosphoproteomes.

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What are the differences between the old Fe-NTA kit (Cat. No. 88300) and the new High-Select Fe-NTA kit (Cat. No. A32992)?

There are four differences between the Fe-NTA kit (Cat. No. 88300) and the new High-Select Fe-NTA kit (Cat. No. A32992) kit as follows: 1. The selectivity - the ratio of number of phosphopeptides over total peptides - was significantly improved to 99% with Cat. No. A32992, because the reagents were extensively optimized for the phosphopeptide selection. 2. The phosphopeptide yield was also increased to 33 µg based on quantitative colorimetric peptide assay (Cat. No. 23275). 3. The reagent is a pre-formulated format, so mixing reagent to prepare the working solution from stock solutions provided in the old kit (Cat. No. 88300) is not necessary, so it is easier to handle. 4. The enrichment protocol is optimized and streamlined, which means there are many fewer steps than with Cat. No. 88300. Thus, it takes <45 min to finish the entire protocol compared to 2 hours with the old kit (Cat. No. 88300).

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I have poor phosphopeptide enrichment specificity using either the High-Select TiO2 Phosphopeptide Enrichment Kit or the High-Select Fe-NTA Phosphopeptide Enrichment Kit. What should I do?

Here are some tips:
- Check the expiration date in order to assure that all components are still good.
- Keep TiO2 tips protected from light during storage.
- Make sure that you are using the correct buffer component for resuspension of your sample, and that the sample is very thoroughly dried and resuspended well.
- When incubating peptide samples with the Fe-NTA kit, ensure that you avoid end-over-end rotation or vortexing; instead gently tap the column to disperse the resin.
- When removing plugs from columns, be sure to avoid pushing liquid back into the column from the plug reservoir.
- After elution, do not store the phosphopeptides in the elution buffer but immediately proceed to drying the sample before storing at -80 degrees C until mass spec analysis.

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