Conjugados de anexina V para la detección de apoptosis
Conjugados de anexina V para la detección de apoptosis
Citas y referencias (15)
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Conjugados de anexina V para la detección de apoptosis

Detecte las primeras etapas de la apoptosis con la anexina V independiente Alexa Fluor, APC, Pacific Blue, PE, FITC y conjugados de biotina mediante citometría de flujo.
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Número de catálogoExcitación/emisiónLíneas láser del citómetro de flujoConjugado
A35110650/660633-637APC (Aloficocianina)
A13201495/519488Alexa Fluor 488
A13199494/518488FITC
A13202578/603532, 561Alexa Fluor 568
A23202346/442UVAlexa Fluor 350
A23204650/665633-637Alexa Fluor 647
A35108555/565532, 561Alexa Fluor 555
A35109679/702633-637Alexa Fluor 680
A35111565/578488, 532, 561PE
A35122410/455405Pacific Blue
Número de catálogo A35110
Precio (USD)
-
Excitación/emisión:
650/660
Líneas láser del citómetro de flujo:
633-637
Conjugado:
APC (Aloficocianina)
Consiga una detección rápida y fiable de la apoptosis celular temprana con conjugados independientes de anexina V para la detección de apoptosis. Los conjugados de anexina V ofrecen una diferencia de hasta 100 veces en la intensidad de la señal de fluorescencia entre células apoptóticas y no apoptóticas mediante citometría de flujo.
La anexina V tiene una alta afinidad a la fosfatidilserina (PS), que se expone en el recubrimiento externo de las células que experimentan apoptosis. Debido a esta afinidad, los reactivos de anexina V etiquetados fluorescentemente se utilizan comúnmente en la investigación de la apoptosis.

Los conjugados de anexina V proporcionan métodos de detección rápidos y fiables para estudiar la externalización de la fosfatidilserina, un indicador de las etapas intermedias de la apoptosis. La diferencia en la intensidad de la fluorescencia entre las células apoptóticas y no apoptóticas teñidas con nuestros conjugados de anexina V fluorescente, medida por citometría de flujo, suele ser de aproximadamente 100 veces.

En colaboración con Nexins Research BV, proporcionamos los mejores y más brillantes conjugados de anexina V disponibles, incluidos los conjugados de anexina V Alexa Fluor 350, 488, 555, 568, 594, 647 y 680, así como los conjugados de anexina V APC, biotina-X, FITC, Pacific Blue y PE. Los conjugados de anexina V altamente fluorescente proporcionan métodos de detección rápidos y fiables para el estudio de la externalización de la fosfatidilserina, uno de los primeros indicadores de apoptosis.

El conjugado de anexina V Pacific Blue es excitable con violeta, lo que lo hace ideal para instrumentos con un láser violeta y para experimentos multicolor que incluyan colorantes verdes o rojos fluorescentes.

Los beneficios de nuestros conjugados de anexina V incluyen:
• Conjugado con los colorantes Invitrogen Alexa Fluor y eFluor para señales más brillantes
• Conjugado para todos los láseres disponibles
• Disponible como reactivos independientes o kits fáciles de usar

La tinción de anexina V para detectar células apoptóticas solo se puede realizar en células y tejidos vivos. Si las muestras se van a fijar después de la tinción, se requieren condiciones específicas para lograr la retención transitoria de la señal. Estas incluyen el uso de un método de fijación a base de aldehídos sin alcohol, el uso de tampones que contengan Ca2+ y evitar los tensioactivos/detergentes. Para su comodidad, también ofrecemos un tampón concentrado de unión a anexina que facilita la unión de la anexina V a la fosfatidilserina en ensayos de apoptosis.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
ColorRojo
DescripciónConjugado de anexina V, APC (anexina V APC) (sustituye al producto anexina V05)
Excitación/emisión650/660
Líneas láser del citómetro de flujo633-637
Para utilizar con (equipo)Citómetro de flujo
Contenido del kitContiene 1 vial de conjugado de anexina V, APC.
N.º de reacciones50
Tipo de productoConjugado de anexina V
Cantidad250 μL
Condiciones de envíoHielo húmedo
ConjugadoAPC (Aloficocianina)
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Almacenar en el refrigerador (2 °C a 8 °C) y proteger de la luz.

Preguntas frecuentes

I trypsinized my adherent cells and labeled with annexin V, and now my flow data is showing a high percentage of apoptotic cells even for control, untreated cells. What is the problem?

Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. Allow the cells to recover for about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium after trypsinizing/scraping so that they can recover their membrane integrity before staining. For lightly adherent cell lines, such as HeLa and NIH 3T3, another option is to use non-enzyme treatments like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I detect annexin V staining in an imaging assay?

Annexin V staining is not typically used in imaging experiments; it is a better reagent for flow cytometry analysis. All cells will stain to some extent, so it can be difficult to distinguish a relatively bright annexin V-stained cell from a dimmer non-apoptotic cell. Caspase activation, detected using our CellEvent Caspase 3/7 or Image-iT LIVE Caspase detection kits, is a better method for detecting apoptosis in an imaging assay.

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When should I stain adherent cells with annexin V for flow cytometric analysis? Before or after I trypsinize them?

Trypsinize first and then allow the cells to recover about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium before staining with annexin V conjugates. Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing for annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. For lightly adherent cell lines such as HeLa and NIH 3T3, you could use a less harsh (non-enzymatic) dissociation product like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I fix my cells after annexin V staining?

Yes, this is possible. We have established protocols for annexin V staining combined with intracellular staining of lymphocytes that can be found here. The most important step is to leave some binding buffer in the suspension when fixation is started. Compared to staining of live cells, the intensity of the annexin V signal may be somewhat reduced.

I am trying to label adherent cells with annexin V and am finding that everything is getting labeled. How can I fix this?

Treating cells with trypsin or other reagents to detach adherent cells causes damage to the membrane, such that cells will be labeled with annexin V. The best way to avoid this problem is to allow your cells to recover for 30-45 min in the incubator. Swirl the tube/plate/flask every few minutes to prevent re-attachment. After this recovery period, you can label your cells with annexin V and analyze by flow cytometry.

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Citations & References (15)

Citations & References
Abstract
Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Haskó G, Hawkins BJ, Madesh M, Pacher P
Journal:Nat Protoc
PubMed ID:17853886
'Annexin V and Sytox Green are widely used markers to evaluate apoptosis in various cell types using flow cytometry and fluorescent microscopy. Recently, a novel fluoroprobe MitoSOX Red was introduced for selective detection of superoxide in the mitochondria of live cells and was validated for confocal microscopy and flow cytometry. ... More
Cathepsin D and H2O2 stimulate degradation of thioredoxin-1: implication for endothelial cell apoptosis.
Authors:Haendeler J, Popp R, Goy C, Tischler V, Zeiher AM, Dimmeler S
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16263712
'Cathepsin D (CatD) is a lysosomal aspartic proteinase and plays an important role in the degradation of proteins and in apoptotic processes induced by oxidative stress, cytokines, and aging. All of these stimuli are potent inducers of endothelial cell apoptosis. Therefore, we investigated the role of CatD in endothelial cell ... More
Role of superoxide, nitric oxide, and peroxynitrite in doxorubicin-induced cell death in vivo and in vitro.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Bátkai S, Kashiwaya Y, Haskó G, Liaudet L, Szabó C, Pacher P,
Journal:Am J Physiol Heart Circ Physiol
PubMed ID:19286953
'Doxorubicin (DOX) is a potent available antitumor agent; however, its clinical use is limited because of its cardiotoxicity. Cell death is a key component in DOX-induced cardiotoxicity, but its mechanisms are elusive. Here, we explore the role of superoxide, nitric oxide (NO), and peroxynitrite in DOX-induced cell death using both ... More
FTY720 increases CD74 expression and sensitizes mantle cell lymphoma cells to milatuzumab-mediated cell death.
Authors:Alinari L, Mahoney E, Patton J, Zhang X, Huynh L, Earl CT, Mani R, Mao Y, Yu B, Quinion C, Towns WH, Chen CS, Goldenberg DM, Blum KA, Byrd JC, Muthusamy N, Praetorius-Ibba M, Baiocchi RA,
Journal:Blood
PubMed ID:22042694
'Mantle cell lymphoma (MCL) is an aggressive B-cell malignancy with a short median survival despite multimodal therapy. FTY720, an immunosuppressive drug approved for the treatment of multiple sclerosis, promotes MCL cell death concurrent with down-modulation of phospho-Akt and cyclin D1 and subsequent cell-cycle arrest. However, the mechanism of FTY720-mediated MCL ... More
Flow cytometry-based apoptosis detection.
Authors:Wlodkowic D, Skommer J, Darzynkiewicz Z,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19609746
'An apoptosing cell demonstrates multitude of characteristic morphological and biochemical features, which vary depending on the stimuli and the cell type. The gross majority of classical apoptotic hallmarks can be rapidly examined by flow and image cytometry. Cytometry thus became a technology of choice in diverse studies of cellular demise. ... More
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