Reactivo de etiquetado de proteínas No-Stain™

El reactivo de marcado de proteínas Invitrogen No-Stain proporciona un método flexible, preciso, rápido y fiable para visualizar y normalizar proteínas en un gel o en una membrana (después de la transferencia). Forma enlaces covalentes a proteínas en geles o membranas en 10 minutos, no requiere ningún paso de destinción, y se puede visualizar instantáneamente usando cualquier sistema de adquisición de imágenes de los que se suele disponer. El reactivo No-Stain no requiere geles u otros reactivos en particular y es compatible con los tintes de gel y los flujos de trabajo de inmunotransferencia (western blot).

Visualización instantánea de proteínas en geles
Los pasos de tinción o destinción Coomassie o de otro tipo pueden resultar extremadamente laboriosos y complejos. En 10 minutos, el reactivo de marcado de proteínas No-Stain forma enlaces covalentes con las cadenas laterales de los aminoácidos de lisina en todas las proteínas dentro de un gel. Dado que la lisina es uno de los aminoácidos más abundantes, el reactivo No-Stain permite la detección de todas las proteínas en un gel o en una membrana, y la fuerte emisión de señal del reactivo covalentemente enlazado proporciona sensibilidad a nivel de nanogramo.

• Alternativa a los reactivos de tinción de geles tradicionales: proporciona una normalización más precisa sobre una amplia variedad de concentraciones de lisado de proteínas (de 1 a 80 μg).
• Sensible: límite de detección de 20 ng por banda.
• Específico: solo forma enlaces con las cadenas laterales de lisina de las proteínas. El reactivo no enlazado no emite señal, lo que permite una relación señal-ruido superior.
• Flexible: no es necesario que cambie de geles para disfrutar de un método sin tinción. El reactivo No-Stain proporciona un práctico método sin tinción en combinación con cualquier tipo de gel (prefundido o vertido de su propio gel).

Consiga inmunotransferencias cuantitativas (western blotting) de la máxima calidad
La normalización de proteínas es un paso crítico para obtener una inmunotransferencia (western blotting) cuantitativa fiable y reproducible. La normalización total de proteínas se considera el paso más importante en la inminotransferencia (western blotting) cuantitativa. Muchas de las principales revistas han desarrollado directrices sobre cómo presentar las investigaciones sobre inmunotransferencia (western blotting) y a continuación puede encontrar algunas de ellas citadas.

• «Para las comparaciones cuantitativas, se deben utilizar los reactivos, controles y métodos de adquisición de imágenes adecuados con rangos de señales lineales». (Nature)
• «Registre cómo se obtuvieron los datos, si la intensidad de la señal guardaba una relación directa con la carga de antígenos y cómo se normalizó la carga de proteínas». (Journal of Biological Chemistry)
• «Normalice la intensidad de la señal con respecto a la carga total de proteínas (evaluado por membranas de tinción para la proteína total) siempre que sea posible». (Journal of Biological Chemistry)
• «Las proteínas de limpieza no se deben usar para la normalización sin tener pruebas de que las manipulaciones no afectan a la expresión». (Journal of Biological Chemistry)

Un control preciso de la carga debe mostrar una relación directa entre la intensidad de la señal y la carga de la muestra en todas las condiciones experimentales. La intensidad de la señal que se obtiene al marcar proteínas totales en una membrana con reactivo No-Stain garantiza una relación directa entre la intensidad de la señal y la carga de la muestra (consulte la figura siguiente) en todas las condiciones experimentales. Por lo tanto, el uso del reactivo No-Stain en aplicaciones de inmunotransferencia (western blotting) cuantitativa permite el uso de proteínas totales como un control de carga ideal.

• Protocolo fácil de usar: etiquetado de proteínas en un plazo de 10 minutos en membranas de nitrocelulosa o PVDF
• Visualización rápida mediante una amplia gama de sistemas de imagen con fuentes de luz UV o fluorescencia
• Normalizacion total exacta de proteínas: el amplio rango lineal para la detección de proteínas de 1–80 μg permite la detección de señales No-Stain junto con la señal de la proteína objetivo para lograr una normalización exacta de la proteína total
• Sensible y estable: nivel nanométrico de sensibilidad con una señal estable compatible con los pasos de inmunodetección posteriores
• Análisis superior: las proteínas de limpieza son susceptibles a la saturación de la señal y otras variaciones biológicas que no se observan cuando se utiliza el reactivo No-Stain para la normalización de las proteínas totales

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