Kit PARIS™

El sistema Ambion™ PARIS™ se utiliza para el aislamiento de ARN y proteínas nativas de la misma muestra experimental. El kit también permite la separación de fracciones nucleares y citoplasmáticas antes del aislamiento de ARN o proteínas. El kit contiene suficientes reactivos para 50 purificaciones de 1 a 75 mg de tejido o de 100 a 10⁷ células cada una.

• Procedimiento rápido y sencillo
• Aísle el ARN nuclear y citoplásmico y la proteína de las células cultivadas
• Aísle el ARN total y la proteína de las células o tejidos cultivados
• Sin extracción de fenol ni precipitación con alcohol
• Reduce el tiempo, el coste y la variabilidad entre muestras experimentales independientes

El aislamiento de ARN de alta calidad es el primer paso para una variedad de análisis de expresión génica. Muy a menudo, también se requieren estudios complementarios al nivel de proteínas. Normalmente, estos análisis se realizan utilizando diferentes alícuotas de la misma muestra experimental. Sin embargo, cuando se trabaja con muestras raras, difíciles de obtener o muy pequeñas, a veces no resulta práctico aislar el ARN y las proteínas nativas de forma independiente. En los estudios que involucran un gran número de muestras, reactivos caros o variabilidad inherente (por ejemplo, transfección celular), la adición de muestras experimentales independientes no solo es costosa y supone mucho tiempo, sino que también puede conducir a resultados inconsistentes. Para resolver estos problemas, se ha desarrollado el sistema de aislamiento de proteínas y ARN (sistema PARIS™). Permite el aislamiento de ARN y proteínas de la misma muestra experimental (consulte la figura). Utilizando el sistema PARIS™, el ARN y la proteína pueden aislarse simultáneamente de lisados de células enteras. Alternativamente, el ARN y la proteína pueden aislarse de fracciones nucleares y citoplásmicas separadas. El tejido o las células cultivadas se homogeneizan primero en el tampón de interrupción celular frío-hielo para preparar un lisado celular total. Dado que la homogeneización se realiza rápidamente sobre hielo y en presencia de detergente, tanto la proteína como el ARN pueden purificarse directamente a partir de este lisado. Para el aislamiento de ARN, una parte del lisado celular total se mezcla inmediatamente con un volumen igual de solución de lisis/unión. El ARN total se purifica a partir de la mezcla mediante un filtro de fibra de vidrio que une el ARN. Después de realizar los tres pasos de lavado rápido, el ARN de alta calidad se eluye en forma concentrada. El procedimiento completo se puede realizar en menos de 20 minutos. Nota: Este kit no se recomienda para tejidos con altas concentraciones de ribonucleasas, como el páncreas.

Compatible con la mayoría de las aplicaciones posteriores
El ARN aislado de fracciones totales, nucleares o citoplásmicas con el procedimiento PARIS™ puede usarse en una variedad de aplicaciones posteriores, incluidas la hibridación de transferencias, la traducción in vitro, la síntesis de ADNc y la RT-PCR. Se recomienda un tratamiento con ADNasa I para el ARN que se utilizará en experimentos de RT-PCR (consulte los productos acompañantes). Las fracciones de proteína se pueden utilizar directamente para la mayoría de las aplicaciones comunes, incluyendo ensayos funcionales, inmunoprecipitación, western blotting o electroforesis bidimensional en gel (consulte las figuras).

Productos acompañantes:
Los reactivos de tratamiento y eliminación de ADNasa TURBO™ DNA-free™ o DNA-free™ (SKU n.° AM1907 y AM1906, respectivamente) son ideales para eliminar rápidamente trazas de ADN de las muestras de ARN total y nuclear sin extracción de fenol ni precipitación de alcohol. La fracción de ARN citoplasmático está prácticamente libre de contaminación de ADN.