Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)
Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)
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Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)

Thermo Scientific Klenow Fragment, exo-, es el fragmento grande de la ADN polimerasa I. Presenta actividad de la polimerasa 5'→3',Más información
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Thermo Scientific Klenow Fragment, exo-, es el fragmento grande de la ADN polimerasa I. Presenta actividad de la polimerasa 5'→3', pero carece de las actividades exonucleasas 3'→5' y 5'→3' de la ADN polimerasa I. La actividad exonucleasa 3'→5' de la enzima se elimina por mutaciones en el sitio activo de la exonucleasa 3'→5'.

Características destacadas

• Carece de actividad exonucleasa 3'→5'
• Incorpora nucleótidos modificados (por ejemplo, Cy3, Cy5 y nucleótidos marcados con flurosceína, rodamina, aminoalilo y biotina)
• Activa en enzimas de restricción, PCR y tampones RT

Aplicaciones
• Etiquetado de ADN mediante cebado aleatorio
• Etiquetado por relleno de extremos 5' de dsADN
• Amplificación por desplazamiento de cadenas (SDA)
• Secuenciación de ADN por el método Sanger

Nota

Klenow Fragment, exo-, no se recomienda para reacciones de blunting para producir extremos romos de ADN antes de la ligación de ADN, puesto que, con frecuencia, añade uno o varios nucleótidos adicionales al extremo 3' de los sustratos de ADN de extremos romos independientemente de la plantilla.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tampón compatibleEnzima de restricción, PCR, tampón RT
PolimerasaDNA Polymerase I
Tipo de productoFragmento Klenow
Cantidad300 U
Concentración5 U/μl
Unit SizeEach

Preguntas frecuentes

What are the differences between Thermo Scientific DNA Polymerase I, Klenow Fragment, and Klenow Fragment (exo-)?

Thermo Scientific DNA Polymerase I possesses 5′?3′ DNA synthesis activity, 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, and 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment is the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity and 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, but lacks 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment, exo-, is also the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity, but lacks the 3′?5′ and 5′?3′ exonuclease activities.

What conditions are optimal for fill-in reactions using Klenow (Large fragment of DNA Polymerase)?

Klenow can be used to "fill in" 5' overhangs of double-stranded DNA fragments using common restriction endonuclease buffers. We recommend REact 2 buffer (1X concentration is 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2) , but other buffers will also work.

Fill-in Reaction Conditions:

1. Dilute Large Fragment of DNA Polymerase I to 0.5 U/µL with Klenow Dilution Buffer.
2. To a 1.5-mL microcentrifuge tube on ice, add: 10X REact 2 Buffer - 3 µL, 0.5 mM dATP - 1 µL, 0.5 mM dCTP - 1 µL, 0.5 mM dGTP - 1 µL, 0.5 mM dTTP - 1 µL, DNA 0.5-1 µg, Large fragment of DNA Polymerase I - 1 µL, Autoclaved distilled water to 30 µL.
3. Mix gently and centrifuge briefly to bring the contents to the bottom of the tube.
4. Incubate at room temperature for 10-15 minutes or 20 minutes on ice.
5. Terminate fill-in reaction by phenol extraction.

To label the DNA fragment, use 1-2 µL of [alpha-32P]dNTP (400 Ci/mmol, 10 mCi/mL) (24-48 pmoles) instead of the corresponding cold dNTP.

Note: Thermo Fisher Scientific also offers an Exo minus Klenow, which is provided with its own buffers.