Transcriptasa inversa Maxima H Minus (200 U/μl)
Transcriptasa inversa Maxima H Minus (200 U/μl)
Thermo Scientific™

Transcriptasa inversa Maxima H Minus (200 U/μl)

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La transcriptasa inversa (RT) Thermo Scientific Maxima H Minus se obtuvo a través de la evolución in vitro de la transcriptasa inversa M-MuLV. La enzima posee una actividad polimerasa dependiente de ARN y dependiente de ADN, pero carece de actividad ARNasa H debido a la mutación en el dominio ARNasa H de la transcriptasa inversa M-MuLV. La enzima modificada mediante ingeniería genética ofrece una termoestabilidad considerablemente mejorada, capacidad de procesamiento 50X veces superior, resistencia y una mejor tasa de síntesis en comparación con la transcriptasa inversa M-MuLV natural.

La actividad de la ARNasa H eliminada permite que la enzima produzca transcripciones de ARN muy largas de hasta 20 kb. Debido a su elevada termoestabilidad, la enzima mantiene su completa actividad durante la reacción de transcripción inversa completa y genera los mejores niveles de rendimiento del ADNc. La temperatura de reacción se puede aumentar hasta los 65 °C para una transcripción eficiente de las regiones de ARN con una elevada estructura secundaria o para mejorar la especificidad mediante primer específicos del gen. La procesividad extremadamente alta de la enzima Maxima H Minus resulta en una mayor resistencia a los inhibidores de reacción comunes, como guanidina, formamida y etanol.

Aspectos destacados

• termoestable: 90% activo después de la incubación a 50 °C durante 60 minutos en una mezcla de reacción.
• Activa hasta a 65 °C
• Alta producción de ADNc de longitud completa (hasta 20 kb)
• Alta sensibilidad: síntesis reproducible del ADNc a partir de una amplia variedad de cantidades de entrada de ARN total (de 1 pg a 5 µg)
• Eficiente: síntesis del ADNc completa en un periodo de entre 15 y 30 minutos
• Aumento de la resistencia a los inhibidores comunes de la reacción
• Incorpora nucleótidos modificados

Aplicaciones

• Síntesis de ADN complementario de primera cadena para RT-PCR y RT- PCR en tiempo real.
• Transcripción inversa a temperaturas elevadas para reducir los efectos de la estructura secundaria.
• Síntesis de ADNc para clonación y expresión.
• Generación de sondas de ADNc etiquetadas para microarrays.
• Análisis de ARN por extensión de primers.

Nota
• También disponible: : Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoStand-alone Enzyme
Temperatura óptima de reacciónDe 50 °C a 55 °C
Cantidad10.000 unidades
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaMaxima H Minus
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)Hasta 20 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Concentración200 U/μl
GC-Rich PCR PerformanceHigh
Velocidad de reacción15 a 30 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La transcriptasa inversa Maxima H Minus (10000 unidades a una concentración de 200 U/μl) se suministra con tampón RT 5X (250 mM de Tris-HCl [pH 8,3 a 25 °C], 375 mM de KCl, 15 mM de MgCl2, 50 mM de DTT).
Almacenar a - 20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

Is it preferable to use elevated temperature in the RT reaction when using Maxima reverse transcriptases?

cDNA synthesis at higher temperatures ensures successful transcription of RNA with high levels of secondary structure, reducing issues of primer access to template. Therefore, we do recommend to use RT enzymes with high thermostability, e.g. Maxima and Maxima H Minus Reverse Transcriptases, which provide higher yields of full-length cDNA, better sensitivity, and successful transcription of GC-rich templates.

Is Maxima H Minus Reverse Transcriptase (200 U/µL) (Cat. No. EP0753) available without the buffer?

No, this product is always provided with the buffer. Connect with us to explore bulk and custom formats.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

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