Kit de conversión de bisulfito EpiJET
Kit de conversión de bisulfito EpiJET
Thermo Scientific™

Kit de conversión de bisulfito EpiJET

El kit de conversión de bisulfito Thermo Scientific EpiJET está diseñado para la conversión de bisulfito simple y fiable deMás información
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Número de catálogoCantidad
K146150 reacciones
Número de catálogo K1461
Precio (USD)
426,00
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Cantidad:
50 reacciones
Precio (USD)
426,00
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El kit de conversión de bisulfito Thermo Scientific EpiJET está diseñado para la conversión de bisulfito simple y fiable de ADN para el análisis de metilación. En la reacción de bisulfito todas las citosinas no metiladas se desaminan y se convierten en uracilos, mientras que las citosinas metiladas permanecen sin cambios. En la siguiente PCR se detectan como timinas las citosinas no metiladas convertidas en bisulfito.

El kit de conversión de bisulfito EpiJET integra la desnaturalización térmica del ADN y las reacciones de conversión de bisulfito en un solo paso. Este paso se puede realizar siguiendo un protocolo largo o corto, dependiendo de la aplicación posterior del ADN modificado. El ADN convertido se une a una membrana de una microcolumna para la desulfonación en columna y los siguientes pasos de purificación del ADN. El ADN convertido se eluye en un pequeño volumen de tampón de elución y es adecuado para una serie de técnicas utilizadas para el análisis del estado de metilación, incluyendo PCR, qPCR, COBRA y secuenciación.

Características destacadas

• Alta eficiencia de conversión y especificidad (≥99 %)
• Flexibilidad, proporcionada por el protocolo de conversión de ADN corto
• ADN puro, adecuado para aplicaciones posteriores y almacenamiento a largo plazo

Aplicaciones

El ADN convertido se puede utilizar en:

• PCR
• qPCR
• Análisis combinado de restricción de bisulfitos (COBRA)
• Secuenciación

Incluye

• Reactivo de modificación
• Solución de modificación I
• Solución de modificación II
• Tampón de unión para kit de conversión de bisulfito
• Tampón de lavado (conc.) para kit de conversión de bisulfito
• Tampón de elución
• Tubos
• Microcolumnas de purificación de ADN y tubos de recogida
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de productoKit de conversión de bisulfito
Cantidad50 reacciones
Línea de productosEpiJET
Unit SizeEach

Preguntas frecuentes

My PCR post-bisulfite conversion failed. What can you suggest?

Here are some recommendations:

- Primers: Ensure that your primers are designed to amplify the converted template. We recommend primers that are 24-32 nts in length and contain no more than 2-3 mixed bases (for base-pairing to C or T residues). The 3' end of your primer should not contain a mixed base or end in a residue whose conversion state is unknown.
- Polymerase: We recommend using a hot-start Taq polymerase such as Platinum Taq DNA Polymerase, Platinum Taq High Fidelity, or AccuPrime Taq DNA Polymerase. Proof-reading polymerases are not recommended because they cannot read through uracil present in DNA templates.
- Amplicon size: Bisulfite modification is harsh and may cause strand breaks. Most research publications recommend 200 bp lengths. Larger amplicons can be generated, but this requires an optimized protocol.
- Template DNA: We recommend using 2-4 µl of eluted DNA for each PCR reaction. Ensure that total template DNA is less than 500 ng.

Where can I find troubleshooting tips for Sanger sequencing of my bisulfite converted DNA?

Please use the following link (http://www.thermofisher.com/us/en/home/technical-resources/technical-reference-library/capillary-electrophoresis-applications-support-center/sanger-sequencing-support/sanger-sequencing-support-troubleshooting.html) for troubleshooting help.

Where can I find troubleshooting tips for next-generation sequencing of my bisulfite converted DNA?

For next-generation sequencing troubleshooting help, please visit the troubleshooting pages within our Next-Generation Sequencing Support Center (thermofisher.com/ngssupport).

I think that my DNA may be under-bisulfite converted (incomplete). What do you recommend?

Ensure that the DNA used for bisulfite conversion is pure. If particulate matter is present after adding the CT Conversion Reagent, then centrifuge the material at high speed and perform the conversion with the clear supernatant. Also, ensure that all of the liquid is at the bottom and not in the cap or walls of the PCR tube before performing the conversion reaction.

What program can I use to design primers for methylation mapping experiments?

You can use Methyl Primer Express Software to design primers for methylation studies. You can download the program for free from here (http://resource.thermofisher.com/page/WE28396_1/).