Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid
Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid
Thermo Scientific™

Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid

El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Thermo Scientific RevertAid es un sistema completo para la síntesisMás información
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K1622100 reacciones
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N.º de reacciones:
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El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Thermo Scientific RevertAid es un sistema completo para la síntesis eficaz de la primera cadena de ADNc a partir de moldes de ARN. El kit usa transcriptasa inversa (RT) RevertAid, una RT recombinante M-MuLV que mantiene la actividad a 42-50 °C y es adecuada para la síntesis de ADNc de hasta 13 kb. El inhibidor de ARNasa RiboLock que se suministra con el kit protege eficazmente los moldes de ARN de la degradación.
El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid se suministra con cebadores hexaméricos aleatorios y oligo(dT)18. El cebador oligo(dT)18 se recuece de forma selectiva con la cola poli(A) del ARNm. Los cebadores hexaméricos aleatorios no requieren la presencia de la cola poli(A), por lo que se pueden emplear para la transcripción de las regiones de extremo 5' del ARNm o la síntesis de especies de ARN que carecen de una cola poli(A) (p. ej., microARN). Con el kit también pueden emplearse cebadores específicos de genes.

Aspectos destacados

• Primera cadena de ADN complementario completa de hasta 13 kb
• Temperatura de reacción óptima 42 °C
• Kit completo: se incluyen todos los componentes de la reacción RT

Aplicaciones

• Síntesis de la primera cadena de ADNc para RT-PCR y RT-qPCR
• Construcción de bibliotecas de ADNc completo
• Síntesis de ARN antidetección

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoKit
N.º de reacciones100 reacciones
Temperatura óptima de reacción42 °C
Cantidad100 reactions
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaRevertAid
Actividad de la ribonucleasa HSí
Condiciones de envíoHielo seco
Tamaño (producto final)Hasta 13 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Para utilizar con (aplicación)PCR en tiempo real (PCRq)
Velocidad de reacción60 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento

• Transcriptasa inversa RevertAid
• Inhibidor de ARNasa RiboLock
• Tampón de reacción 5X
• Mezcla de dNTP
• Cebador de oligo(dT)18
• Cebador hexamérico aleatorio
• ARN GAPDH de control
• Cebador directo GAPDH (10 μM)
• Cebador inverso GAPDH (10 μM)
• Agua sin nucleasas

Almacenar a –20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

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