Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus
Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus
Thermo Scientific™

Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus

El kit de síntesis de ADNc de primera cadena Thermo Scientific Maxima H Minus es un sistema completo que permiteMás información
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Número de catálogoIncluyeN.º de reacciones
K1681Kit with dsDNase20 reacciones
K1651Kit only20 reacciones
K1652Kit only100 reacciones
K1682Kit with dsDNase100 reacciones
Número de catálogo K1681
Precio (USD)
-
Incluye:
Kit with dsDNase
N.º de reacciones:
20 reacciones
Pedido a granel o personalizado
El kit de síntesis de ADNc de primera cadena Thermo Scientific Maxima H Minus es un sistema completo que permite una síntesis muy eficiente de la primera cadena de ADNc.El kit emplea la transcriptasa inversa (RT) Maxima H Minus, una enzima avanzada derivada de la evolución in vitro de la RT M-MuLV.Esta enzima cuenta con el máximo grado de termoestabilidad entre los derivados de la RT M-MuLV y carece de actividad de ARNasa H.El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus permite la síntesis de ADNc de gran longitud, de hasta 20 kb, a temperaturas elevadas (hasta 65 °C), con lo que sustituye las capacidades de otros sistemas para producir ADNc de longitud completa.Gracias a las elevadas tasas de síntesis, la reacción se puede completar en 30 minutos.

Aspectos destacados

• Aumento de las temperaturas de reacción: la primera cadena de ADNc se puede sintetizar a una temperatura de entre 42 y 65 °C
• Alto rendimiento de ADNc de primera cadena de longitud completa: con plantillas de ARN de hasta 20 kb
• Cebado flexible: oligo(dT)18, hexámeros aleatorios o cebadores específicos del gen

Aplicaciones

• Síntesis de ADNc de primera cadena para RT-PCR y RT-qPCR
• Construcción de bibliotecas de ADNc
• Creación de sondas para hibridación
• Síntesis de ARN antidetección

Incluye

• El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus contiene la mezcla de enzimas Maxima H Minus, oligo(dT)18 hexámeros aleatorios o cebadores, tampón 5X RT, mezcla de dNTP, y agua sin nucleasa.

Información adicional acerca de los componentes de reacción

• La mezcla de enzimas Maxima H Minus contiene transcriptasa inversa Maxima H Minus e inhibidores de la ARNasa RiboLock.El inhibidor de RNasa RiboLock es un protector eficaz de las plantillas de ARN frente a la degradación por ARNasas A, B y C a una temperatura hasta 55 °C.
•Con el kit se suministran cebadores oligo(dT)18 y hexaméricos aleatorios.Los cebadores hexámeros aleatorios realizan uniones no específicas y se utilizan para sintetizar ADNc de todos los ARN de una población de ARN.El cebador oligo(dT)18 se recuece de forma selectiva con el extremo 3' de ARN poli(A) y sintetiza únicamente ADNc del ARNm con extremo poli(A).El kit también permite la utilización de cebadores específicos de genes para cebar la síntesis a partir de una secuencia especificada.
•La mezcla de dNTP de 10 mm es una solución acuosa premezclada de dATP, dTTP, dCTP y dGTP.
•El agua libre de nucleasas se suministra para preparar la reacción y diluir el ADN de las muestras.La ausencia de endo-, exodesoxirribonucleasas, ribonucleasas y fosfatasas ha sido confirmada por pruebas de calidad apropiadas.

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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoTubo
IncluyeKit with dsDNase
N.º de reacciones20 reacciones
Temperatura óptima de reacciónDe 50 °C a 55 °C
Cantidad20 reacciones de 20 μl
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaMaxima H Minus
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)Hasta 20 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Para utilizar con (aplicación)RT-PCR
GC-Rich PCR PerformanceHigh
Velocidad de reacción30 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus con ADNasa bicatenaria contiene mezcla de enzimas Maxima H Minus, ADNasa bicatenaria, tampón de ADNasa bicatenaria 10X, cebadores oligo(dT)18 y hexaméricos aleatorios, tampón 5X RT, mezcla dNTP y agua libre de nucleasas.
Almacénese a -20 °C.

Preguntas frecuentes

How can I inactivate Thermo Scientific dsDNase?

dsDNase can be inactivated by incubating the sample at 55°C for 5 min in the presence of 10 mM DTT.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

Does dsDNase cleave ssDNA?

No, dsDNase cleaves only double-stranded DNA. However, if ssDNA forms double-stranded structures, it will act as a target for dsDNase. Because of this, long and complex ssDNA may be partially degraded. Therefore we recommend additional dsDNase inactivation step for RT-PCR amplification of targets 3 kb or longer. The inactivation step should be performed by 5 min incubation at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT.

Can dsDNase be added directly to a reverse transcription reaction to remove genomic DNA?

No. RT reaction composition inhibits dsDNase activity, and genomic DNA removal may be incomplete.