El Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación proporciona una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y de un solo paso para la inserción directa de productos de PCR de extremos romos amplificados con polimerasas de corrección en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™4Blunt-TOPO™ (véase la figura) con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven más secuencia de inserto y menos secuencia de vector de cada reacción. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija.

Vector pCR™4Blunt-TOPO™: optimizado para secuenciación
Hemos eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR™4Blunt-TOPO™ para acortar la distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4Blunt™ TOPO tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno.

Manipulación y selección de clones pCR™4Blunt-TOPO™
El vector pCR™4Blunt-TOPO™ contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores de T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar las células competentes de E. coli proporcionadas.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones con el inserto deseado, podrá sondear menor cantidad de clones y ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4Blunt-TOPO™ utilizado en este kit se suministra sin salientes para una ligadura eficaz de productos de PCR creados por polimerasas de corrección termoestables que dejan productos de PCR con extremo romo.

La referencia en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación: formatos del kit
El kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para secuenciación se puede adquirir con una variedad de células competentes que ofrecen diferentes ventajas en función de sus necesidades:

• Clonación general: Células TOP10 (n.º de cat. K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Clonación de alta eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K2880-20, K2880-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K2895-20)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1^R químicamente competente (n.º de cat. K2835-20)

Enlaces relacionados

• Creación de vectores personalizados y servicios de clonación
• Guía de selección del kit de purificación de ADN plasmídico
• Reactivos, instrumentos y suministros de PCR