Los kits TOPO™ TA Cloning™ para subclonación proporcionan una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y de un solo paso («clonación TOPO™») para la inserción directa de productos PCR amplificados con polimerasa Taq en un vector plasmídico para subclonación. Cada kit utiliza el vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA con prácticos sitios de restricción para subclonación. Los kits de clonación están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Características de los kits TOPO™ TA Cloning™ para subclonación:

• Rápido y fácil—de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación
• Eficaz—obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado
• Probado—rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas.
• Sencillo—no se requieren ligasas, procedimientos posteriores a la PCR ni primers de PCR con secuencias específicas.

Kits TOPO™ TA Cloning™ para subclonación—descripción general

• Vector: vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA—vector de subclonación con 15 prácticos sitios de restricción que flanquean al inserto para una subclonación direccional sencilla
• Método de clonación: TOPO™ TA Cloning™ —ligación en 5 minutos basada–en topoisomerasa I de productos de PCR con salientes 3′-A (amplificados con polimerasa Taq) al vector TOPO™ con salientes T
• Células competentes: Varias opciones—seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1–bacteriófaga y competentes de rápido crecimiento o utilice las suyas propias

Vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA—simplicidad en clonación y subclonación
El vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA se linealiza con salientes 3'-timidina (T) para la ligación directa de productos de PCR–amplificados con polimerasa Taq (clonación TA™) y se «activa» con topoisomerasa I unida covalentemente. No es necesario añadir ligasa y la clonación se completa en 5 minutos. Los sitios EcoRI que flanquean el sitio de inserción del producto de PCR permiten una sencilla escisión de insertos o usar cualquier combinación de 15 prácticos sitios de restricción que flanquean el inserto de PCR para una sencilla subclonación direccional.

Manipulación y selección de clones de pCR™ 2.1-TOPO™ TA
El vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y el gen LacZα para detección azul/blanco.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir la reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones y ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™ 2.1-TOPO™ TA utilizado en este kit se suministra con extremos 3'-T para una ligación eficaz de productos de PCR amplificados con la Taq polimerasa, que contienen extremos 3'A.

El estándar de la clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación: opciones de kits
El kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:

• Clonación general: Células TOP10 (n.º de cat. K4500-01, K4500-40)
• Clonación de gran eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4560-01, K4560-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: Células DH5α-T1R (n.º de cat. K4520-01, K4520-40)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™ -T1R químicamente competente (n.º de cat. K4510-20)
• Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de cat. 450641)

También ofrecemos dos versiones del kit que incluyen un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de cat. K4500-02 y K4510-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para la secuenciación.