TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
TOPO&trade; TA Cloning&trade; Kit, Dual Promoter, with pCR&trade;II-TOPO&trade; Vector and One Shot&trade; Mach1&trade; T1 Phage-Resistant Chemically Competent <i>E. coli</i>
Citas y referencias (1)
Invitrogen™

TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli

Los kits TOPO™ TA Cloning™ se han diseñado para clonar productos de PCR directamente a partir de una reacción deMás información
Have Questions?
Número de catálogoCantidad
K46102025 reacciones
Número de catálogo K461020
Precio (USD)
1.389,96
Each
Añadir al carro de la compra
Cantidad:
25 reacciones
Precio (USD)
1.389,96
Each
Añadir al carro de la compra
Los kits TOPO™ TA Cloning™ se han diseñado para clonar productos de PCR directamente a partir de una reacción de PCR en tan solo 5 minutos (1). Utilizan un vector pCR™-TOPO™ con topoisomerasa I unida covalentemente para la clonación rápida y la generación de recombinantes. Los vectores pCR™-TOPO™ incluyen:

• Salientes 3´-T para la ligadura directa de productos de PCR amplificados con Taq
• Selección de promotores de T7 (pCR™2.1-TOPO™) o T7 y SP6 (pCR™II-TOPO™) para la transcripción y secuenciación in vitro de ARN. Cada vector también contiene sitios de primers directos e inversos M13 para secuenciación.
• Sitios EcoR I que flanquean el sitio de inserción del producto de PCR para una sencilla escisión de insertos
• Diversas opciones de genes de resistencia a kanamicina y ampicilina en E. coli
• Fácil detección de colonias azules/blancas para la selección de recombinantes

Los kits TOPO™ TA Cloning™ están también disponibles en kits combinados junto con un kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ Quick (50 preparaciones) para una purificación rápida de plásmidos de sus insertos clonados TOPO™ para los posteriores análisis.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraMach1™
Tipo de célulaQuímicamente competente
Método de clonaciónTOPO™-TA
Para utilizar con (aplicación)Biología de la cromatina
Línea de productosOne Shot
Tipo de productoKit de clonación
PromotorT7, SP6
Cantidad25 reacciones
VectorVectores TOPO-TA Cloning
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Caja 1:
• Vector pCR™II-TOPO™ activado con la topoisomerasa I
• Tampón de PCR
• Solución salina
• dNTP
• Plantilla de control
• Primers directos e inversos M13
• Primers de PCR de control
• Agua estéril

Almacenar entre -5 y -30 °C.
Todos los reactivos son estables durante 6 meses si se almacenan adecuadamente.

Caja 2:
• E. coli químicamente competente One Shot™ o Electrocomp™
• Medio S.O.C.
• Plásmido de control superhelicoidal pUC19

Almacenar a entre -68 y -85 °C.

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

View all TOPO™ TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II-TOPO™ Vector and One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli FAQs

Citations & References (1)

Citations & References
Abstract
Virus-specific cytotoxic T-lymphocyte responses select for amino-acid variation in simian immunodeficiency virus Env and Nef.
Authors:Evans DT, O'Connor DH, Jing P, Dzuris JL, Sidney J, da Silva J, Allen TM, Horton H, Venham JE, Rudersdorf RA,Vogel T, Pauza CD, Bontrop RE, DeMars R, Sette A, Hughes AL, Watkins DI
Journal:Nature Medicine
PubMed ID:10545993
Cytotoxic T-lymphocyte (CTL) responses to human immunodeficiency virus arise early after infection, but ultimately fail to prevent progression to AIDS. Human immunodeficiency virus may evade the CTL response by accumulating amino-acid replacements within CTL epitopes. We studied 10 CTL epitopes during the course of simian immunodeficiency virus disease progression in ... More