Kit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet, para 405 nm de excitación
Kit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet, para 405 nm de excitación
Invitrogen™

Kit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet, para 405 nm de excitación

El kit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet se utiliza para determinar la viabilidad de las células antesMás información
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Número de catálogoCantidad
L3496380 ensayos
L34955200 ensayos
L34964400 ensayos
Número de catálogo L34963
Precio (USD)
220,32
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Cantidad:
80 ensayos
Precio (USD)
220,32
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El kit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet se utiliza para determinar la viabilidad de las células antes de la fijación y la permeabilización necesarias para la tinción de anticuerpos intracelulares o antes de la eliminación de materiales biopeligrosos mediante fijación en formaldehído. Este kit se ha optimizado y validado para su uso con un citómetro de flujo de láser violeta.

• Estable: los colorantes se han liofilizado en viales separados para mantener la estabilidad

•Resistente: mismo patrón de tinción antes y después de la fijación

• Baja

Consulte una guía de selección para todos los colorantes de viabilidad con fijación para comprobar la citometría de flujo.

Estable
A diferencia de los productos que se venden en forma de solución, la tinción LIVE/DEAD™ Fixable Violet se ha envasado cómodamente en viales de 40 ensayos para ayudar a garantizar la estabilidad y el rendimiento del colorante a largo plazo. Al introducirse en la solución, los colorantes de reactivos de amina perderán su eficacia tras un corto periodo de tiempo; por lo tanto, se recomienda utilizar el total del vial una vez que se haya rehidratado. Si esto no es posible, divida los viales en pequeños volúmenes y almacénelos a -80 °C; evite someterlos a ciclos de congelación y descongelación.

Sólido
Los tintes del discriminador de células muertas pueden ver reducida su sensibilidad tras un tratamiento con fijadores, como los métodos de fijación basados en formaldehído o etanol que resultan necesarios para llevar a cabo estudios de fosforilación intracelular. La tinción LIVE/DEAD™ Fixable Violet es un tinte de reactivos de amina que se une de forma covalente a las aminas intra y extracelulares. El patrón de tinción se mantiene después de la fijación con formaldehído.

Compensación baja
La tinción LIVE/DEAD™ Fixable Violet se ha seleccionado en función de sus propiedades fluorescentes para minimizar la compensación entre otros tintes violetas y colorantes que se excitan mediante el láser azul a 488 nm. El colorante de reactivos fluorescente de color violeta tiene una excitación máxima de ∼ 416 nm y se excita bien con el láser violeta a 405 nm. Tiene una emisión máxima de ∼ 451 nm, por lo que se puede recoger en el primer canal de la mayoría de citómetros de flujo de láser violeta.

Funcionamiento
En células con membranas comprometidas, el colorante reacciona con aminas libres tanto en el interior de la célula como en su superficie, lo que provoca una intensa tinción fluorescente. En células viables, la reactividad del colorante está limitada a las aminas de la superficie celular, lo que se traduce en una fluorescencia menos intensa. La diferencia de intensidad suele ser 50 veces mayor entre células vivas y muertas, lo que facilita la discriminación.

Colores disponibles
Los tintes de células muertas con fijación LIVE/DEAD™ están disponibles en una amplia variedad de colores para satisfacer sus necesidades de paneles de varios colores.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Permeabilidad celularImpermeable
Tipo de célulaCélulas eucariotas
DescripciónKit de tinción de células muertas LIVE/DEAD™ Fixable Violet, para 405 nm de excitación
Método de detecciónFluorescente
Tipo de coloranteTinción de células muertas violeta de fijación LIVE/DEAD™
FormularioSólido
FormatoTubo(s)
Cantidad80 ensayos
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
SolubilidadDMSO (dimetilsulfóxido)
ColorVioleta
Emission451 nm
Excitation Wavelength Range416 nm
Para utilizar con (aplicación)Ensayo de viabilidad
Para utilizar con (equipo)Citómetro de flujo
Línea de productosLIVE/DEAD
Tipo de productoTinción
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contiene 2 viales de tinción de células muertas con fijación LIVE/DEAD™ y 500 μl de DMSO.

Almacenar a -20 °C.

Preguntas frecuentes

How do I prepare dead cell controls for LIVE/DEAD cell viability assays?

There are two easy options. One is to heat-inactivate the cells by placing at 60 degrees C for 20 minutes. The second is to subject the cells to 70% ethanol. Alcohol-fixed cells can be stored indefinitely in the freezer until use, potentially up to several years.

Centrifuge cells, pellet, and remove supernatant.
Fix cells: Add 10 mL ice cold 70% ETOH to a 15 mL tube containing the cell pellet, adding dropwise at first while vortexing, mix well.
Store in freezer until use.
When ready to use, wash twice and resuspend in buffer of choice.

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Which cell viability kits are compatible with fixation?

The LIVE/DEAD Fixable kits for flow cytometry analysis are compatible with fixation. These kits use amine-reactive cell-impermeant dyes that stain the cell surface of live cells and also the cytosol of dead cells-live cells are dim and dead cells are bright. Since the dye is covalently bound to the cells, it will be retained after fixation. Unfortunately, this method does not work well for imaging-based assays, as all cells are stained and it is difficult to distinguish bright dead cells from dim live cells with a microscope. Ethidium monoazide (EMA; Cat No. E1374) is a cell impermeant nucleic acid stain that can be applied to live cultures and stains only dead cells. After incubation and washing away unbound dye, the cells can be exposed to light to photoactivate EMA to crosslink to dead cell DNA. After crosslinking to dead cell DNA, the samples may be fixed and permeabilized. Image-IT DEAD Green Viability Stain (Cat. No. I10291) for imaging and high-content screening (HCS) analysis is a live-cell impermeant DNA binding dye that is compatible with fixation and permeabilization with good retention up to 48 hours. We also have a LIVE/DEAD Reduced Biohazard Cell Viability Kit (Cat. No. L7013) for imaging and flow analysis that contains two DNA binding dyes, SYTO 10 and Dead Red, that are sufficiently retained to be analyzed soon after 4% glutaraldehyde fixation.
Note: In general, DNA-binding dyes and calcein AM are not compatible with fixation, as these dyes are not covalently bound to components of the cell and will thus slowly diffuse out of cells after fixation, gradually staining all cells as dead.

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Citations & References (3)

Citations & References
Abstract
Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry.
Authors:Perfetto SP, Chattopadhyay PK, Lamoreaux L, Nguyen R, Ambrozak D, Koup RA, Roederer M,
Journal:J Immunol Methods
PubMed ID:16756987
'Membrane-damaged cells caused by either mechanical trauma or through normal biological processes can produce artifacts in immunophenotyping analysis by flow cytometry. Dead cells can nonspecifically bind monoclonal antibody conjugates, potentially leading to erroneous conclusions, particularly when cell frequencies are low. To date, DNA intercalating dyes (Ethidium monoazaide (EMA), Propidium Iodide, ... More
SYTO probes in the cytometry of tumor cell death.
Authors:Wlodkowic D, Skommer J, Darzynkiewicz Z,
Journal:Cytometry A
PubMed ID:18260152
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PubMed ID:22147799
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