Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix
Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix
Thermo Scientific™

Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

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Número de catálogoIncluyeN.º de reacciones
M1681Kit with dsDNase50 reacciones
M1661Kit only50 reacciones
M1662Kit only200 reacciones
M1682Kit with dsDNase200 reacciones
Número de catálogo M1681
Precio (USD)
-
Incluye:
Kit with dsDNase
N.º de reacciones:
50 reacciones
Pedido a granel o personalizado
La mezcla maestra de síntesis de ADNc Thermo Scientific Maxima H Minus proporciona todos los componentes de reacción de síntesis de ADNc en una práctica mezcla maestra de un tubo. Está optimizada para la síntesis de ADNc altamente eficiente para aplicaciones de RT-PCR cuantitativa en dos pasos (RT-qPCR).

Las características incluyen:
• La mezcla maestra de un tubo ayuda a reducir los pasos de pipeteo y mejora la consistencia en los resultados de RT-qPCR
• Aumento de la eficacia de RT en una amplia gama de cantidades de ARN de entrada y objetivos genéticos
• Alta termoestabilidad para permitir reacciones de RT a un intervalo de temperatura de 50 a 65 °C

La mezcla maestra contiene la transcriptasa inversa Maxima H Minus (RT) y el inhibidor de ARNasa RiboLock. Maxima H Minus RT es una enzima avanzada derivada de M-MuLV RT por evolución in vitro. La enzima presenta alta termoestabilidad, robustez, procesabilidad, aumento de la tasa de síntesis de ADNc y falta de actividad de ARNasa H. El inhibidor recombinante de la ARNasa RiboLock protege de forma eficaz las moldes de ARN de la degradación producida por las ARNasas A, B y C a temperaturas de hasta 55 °C. La mezcla maestra también contiene un tampón de reacción, dNTP, oligo (dT)18 y cebadores hexaméricos aleatorios. También se proporciona un tubo separado de mezcla de control sin RT.

La mezcla maestra de síntesis Maxima H Minus es capaz de reproducir la síntesis de ADNc a temperaturas elevadas (50–65 °C). La reacción de síntesis suele completarse en 15–30 minutos.

Información adicional acerca de los componentes de reacción
• La mezcla de control sin RT contiene todos los componentes de la mezcla maestra de síntesis de ADNc Maxima H Minus, excepto RT. La presencia de un producto de PCR en la reacción de control sin RT indica que la reacción está contaminada con ADN. Para mejorar aún más la eficacia de la eliminación del ADN genómico, se recomienda templar la incubación del ARN con ADNasa bc (n.º de cat. 0771).
• Se suministra también agua sin nucleasa para preparar la reacción y diluir la muestra de ADN. La ausencia de exodesoxirribonucleasas, ribonucleasas y fosfatasas se ha confirmado mediante pruebas de calidad adecuadas.

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Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus con dsDNase
Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus
Transcriptasa inversa Maxima H Minus
dsDNase
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoMezcla maestra de síntesis de ADNc
IncluyeKit with dsDNase
N.º de reacciones50 reacciones
Temperatura óptima de reacción50 °C
CantidadEach
Formato de reacciónComponentes premezclados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaMaxima H Minus
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoHielo seco
Tamaño (producto final)Hasta 20 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Para utilizar con (aplicación)Síntesis de ADNc, RT-PCR
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Velocidad de reacción30 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento

• Mezcla maestra de síntesis de ADNc Maxima H Minus (1 x 200 μl)
• Mezcla maestra de síntesis de ADNc Maxima H Minus de control «No RT» (1 x 200 μl)
• ADNasa bicatenaria (1 x 50 μl)
• Tampón de ADNasa bicatenaria 10X (1 x 100 μl)
• Agua sin nucleasas (1 x 1,25 ml)

Almacenar entre –30 °C y –5 °C.

Preguntas frecuentes

Why is there no heat inactivation step for the dsDNase in the protocol for Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix (Cat. No. M1681)?

The novel dsDNase enzyme degrades double-stranded genomic DNA. However, it has no effect on the single-stranded cDNA or the RNA-DNA hybrid. Therefore, the enzyme mix for reverse transcription can be added directly to the dsDNase treated RNA.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

What is the fidelity of RevertAid and Maxima reverse transcriptases?

The fidelity of RevertAid and Maxima reverse transcriptases is the same as that of wild-type M-MuLV RT, which is in the range of 1 error per 15,000-27,000 nucleotides synthesized.