BACE1 (β-Secretase) FRET Assay Kit, red

BACE1 (β-secretasa) es una enzima clave implicada en la producción de beta-péptidos amiloides (beta) que se encuentran en placas amiloides extracelulares de la enfermedad de Alzheimer. En algunos casos, el Alzheimer familiar de inicio temprano se puede atribuir a una mutación “sueca” en la proteína precursora amiloide (APP), lo que mejora drásticamente la división de esta proteína por BACE1. Esta y otras pruebas genéticas y patológicas han llevado a enfoques terapéuticos centrados en la inhibición de BACE1 y otras encimas de fragmentación de APP, como la gamma-secretasa. El kit de ensayo de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) BACE1 proporciona un método sensible y eficaz para la detección de posibles inhibidores BACE1. Este kit utiliza BACE1 expresado en baculovirus purificado y un nuevo sustrato de péptido rojo FRET basado en la mutación “sueca”.

El kit de ensayo BACE1 FRET ofrece:

• Emisión roja para reducir la interferencia compuesta
• Excitación a 545 nm y emisión de lectura a 585 nm
• Un kit de ensayo homogénero, rápido y fácil de usar que se realiza en solución
• Formato versátil para la detección de alto rendimiento
•Resultados estables: las mediciones pueden realizarse durante un máximo de 24 horas

El principio del ensayo BACE1 FRET es el siguiente: El sustrato péptido se sintetiza con dos fluoróforos, un donante fluorescente (un derivado de la rodamina (Rh)) y un aceptor de enfriamiento patentado. La distancia entre estos dos grupos ha sido seleccionada de manera que, al excitar la luz, la energía de fluorescencia del donante (D) es significativamente sofocada por el aceptor (A) a través de un fenómeno mecánico cuántico conocido como transferencia de energía de resonancia (Figura 1). Tras la escisión por la proteasa, el fluoróforo se separa del grupo de enfriamiento, restaurando el rendimiento de fluorescencia total del donante. Por lo tanto, un sustrato péptido débilmente fluorescente se vuelve muy fluorescente sobre la hendidura enzimática; el aumento de la fluorescencia está linealmente relacionado con la tasa de proteólisis.

Fuente de la enzima BACE1:
Una secuencia de ADNc que codifica los aminoácidos 1-460 de BACE1 humano, correspondiente al ectodominio, se expresó en células de insectos recombinantes infectadas por baculovirus. El BACE1 purificado existe con la forma proBACE1 con un peso molecular aparente de 55 kDa y una secuencia N-terminal de TQHGIRLPLR.