Sistema de RT-PCR SuperScript™ III de un paso con ADN polimerasa de alta fidelidad Platinum™ Taq
Sistema de RT-PCR SuperScript&trade; III de un paso con ADN polimerasa de alta fidelidad Platinum&trade; <i>Taq</i>
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Sistema de RT-PCR SuperScript™ III de un paso con ADN polimerasa de alta fidelidad Platinum™ Taq

El sistema de T-PCR SuperScript III One-Step con la alta fidelidad Platinum Taq está diseñado para ofrecer una detección yMás información
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El sistema de T-PCR SuperScript III One-Step con la alta fidelidad Platinum Taq está diseñado para ofrecer una detección y análisis de punto final sensible y de alta fidelidad de moléculas de ARN mediante RT-PCR de un solo paso. El sistema consta de dos componentes principales: Mezcla de enzimas de alta fidelidad SuperScript III RT/ Platinum Taq y mezcla de reacción 2X. La mezcla enzimática combina la transcriptasa inversa SuperScript III y la ADN polimerasa Platinum Taq de alta fidelidad, que es una mezcla enzimática compuesta por ADN polimerasa Taq recombinante, especie de pirococcus polimerasa GB–D y anticuerpos Platinum Taq, que bloquean la actividad de la polimerasa a temperaturas ambiente y permiten la PCR de inicio en caliente. La mezcla de reacción 2X se compone de un sistema de tampón exclusivo optimizado para la transcripción inversa y la amplificación de PCR, Mg 2+ optimizado para uso universal, trifosfatos de desoxirribonucleótido y estabilizadores. Todos los componentes para la síntesis de ADNc y PCR se combinan en un solo tubo con cebadores específicos de genes y ARN objetivo. La transcripción inversa sigue automáticamente los ciclos de PCR sin pasos adicionales. El sistema puede detectar una amplia gama de objetivos de ARN (de hasta 10 kb de longitud) a concentraciones variables (de 1 pg a 1 µg de ARN total).

Nota: Para obtener un rendimiento superior de RT-PCR en un paso, recomendamos el sistema superScript IV One-Step RT-PCR o el sistema SuperScript IV One-Step RT-PCR con DNAasa ez. El sistema de RT-PCR SuperScript IV One-Step combina la alta procesividad de la transcriptasa inversa SuperScript IV con la alta fidelidad de la ADN polimerasa Platinum SuperFi para proporcionar un rendimiento, especificidad y sensibilidad inigualables del producto en menos tiempo y para una amplia gama de objetivos, incluso con muestras de ARN de pureza subóptima.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPCR amplificada, ADNc
FormatoKit
Inicio en calienteInicio en caliente integrado
N.º de reacciones100 reacciones
Temperatura óptima de reacción50 °C
PolimerasaAlta fidelidad Platinum Taq
Cantidad100 reacciones
Formato de reacciónComponentes premezclados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaSuperScript III
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoHielo seco
Tamaño (producto final)10 kb o menos
Material de partidaARN
TécnicaRT-PCR de 1 pasos
Método de detecciónSonda de cebado
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Método de PCRRT-qPCR de 1 paso
Velocidad de reacción30 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento

• Mezcla de enzimas de alta fidelidad Superscript III RT/Platinum Taq (100 μl)
• Mezcla de reacción 2X (3 x 1 ml)
• 5 mM de sulfato de magnesio (500 μl)

Almacenar todos los componentes entre –30 °C y –10 °C.

Preguntas frecuentes

How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?

We recommend using ezDNase (Cat. No. 11766051). ezDNase Enzyme's high specificity for double-stranded DNA enables efficient and fast genomic DNA removal without reduction in the quality or quantity of RNA. ezDNase Enzyme is heat-labile and so can be easily deactivated by heat treatment at moderate temperature (55 degrees C). These features make ezDNase Enzyme an excellent choice for genomic DNA removal prior to reverse transcription reactions.

How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?

The amount of RNA template for a cDNA synthesis is highly flexible and depends upon the amount of sample available and an individual's need. In general, 1 µg total RNA is used in a typical 20-µL RT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourReverse Transcription and RACE Support Center.

Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?

RNase H treatment is not always necessary. Many PCR reactions work without it. However, for cDNA synthesized with RNase H-deficient reverse transcriptases (like SuperScript II, III, and IV), RNA/cDNA hybrids—especially GC-rich ones—may not denature well, reducing PCR sensitivity. RNase H treatment can help in such cases. Additionally, RNase H treatment is beneficial for cloning larger fragments.

What percentage of RNA is converted to cDNA when performing reverse transcription?

This depends highly on the quality of the sample. mRNA itself makes up 1-5% of total RNA. Depending on the primer and enzyme used, reverse transcription can covert >70% of that into cDNA.

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I'm setting up my RT reaction and am trying to decide whether I should use random primers, oligo(dT) primer, gene-specific primer, or oligo(dT)/random mix primers. What would you suggest?

Random primers are the best choice for degraded RNA, RNA with heavy secondary structure, non-polyadenylated RNA, or prokaryotic RNA. It is recommended only for two-step RT-PCR, and typically gives the highest yields, although the cDNA may not necessarily be full length. Oligo(dT) primers are good to use when trying to recover full-length cDNA from 2-step RT-PCR. The reaction is influenced by secondary structure and RNA quality. Gene specific primers should be used for very specific, mainly one-step RT-PCR reactions.

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Citations & References (2)

Citations & References
Abstract
Transcription precedes loss of Xist coating and depletion of H3K27me3 during X-chromosome reprogramming in the mouse inner cell mass.
Authors:Williams LH, Kalantry S, Starmer J, Magnuson T,
Journal:Development
PubMed ID:21471155
'Repression of Xist RNA expression is considered a prerequisite to reversal of X-chromosome inactivation (XCI) in the mouse inner cell mass (ICM), and reactivation of X-linked genes is thought to follow loss of Xist RNA coating and heterochromatic markers of inactivation, such as methylation of histone H3. We analyzed X-chromosome ... More
Influenza A virus molecular virology techniques.
Authors:Zhou B, Wentworth DE,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:22528160
Molecular biological techniques for genomic analysis and for creation of recombinant viruses are critical tools in our efforts to understand and combat influenza A viruses. These molecular virology approaches are used in diagnostics, basic research, molecular epidemiology, bioinformatics, and vaccine development. The majority of the techniques used to study this ... More