Pierce™ Renilla Luciferase Flash Assay Kit
Pierce™ Renilla Luciferase Flash Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Renilla Luciferase Flash Assay Kit

El kit de ensayo de flash de luciferasa de Renilla Thermo Scientific Pierce proporciona a los investigadores un ensayo intracelularMás información
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16165Kit para 1000 reacciones
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Precio (CLP)
751.417
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Kit para 1000 reacciones
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El kit de ensayo de flash de luciferasa de Renilla Thermo Scientific Pierce proporciona a los investigadores un ensayo intracelular de alta sensibilidad para detectar la actividad transcripcional de los elementos reguladores en el lisado de células completas de mamíferos.

Características del kit de ensayo de flash de luciferasa de Renilla:

• Sensible: una mayor sensibilidad permite el uso de menos cantidad de células
• Rentable: los análisis de mayor sensibilidad conllevan un menor consumo de reactivos
• Ahorro de tiempo: los ensayos requieren una manipulación mínima de las muestras
• Compatible con la automatización: adecuado para detección de alto rendimiento
• Práctico: contiene un tampón de lisis celular universal y un reactivo de ensayo de flash optimizado
• Seguro: permite realizar ensayos no radioactivos

Este kit de ensayo de flash contiene reactivos para medir la actividad de la luciferasa de Renilla en lisados de células de mamíferos. Cuando se utiliza con los plásmidos de luciferasa de Renilla verde Thermo Scientific, el kit proporciona un sistema de ensayo de indicador bioluminiscente extremadamente sensible para la detección intracelular de actividad promotora o de vía. La señal producida por la luciferasa de Renilla verde es considerablemente mayor que la señal de luciferasas nativas de luciérnaga o Renilla analizadas en condiciones similares. La salida de luz captada con un luminómetro puede correlacionarse con la cantidad de proteína de la luciferasa de Renilla producida y utilizada para determinar la actividad del promotor que impulsa la expresión de la Renilla.

Incluye:
Tampón de lisis celular, tampón y sustrato de reacción

Requiere:
Luciferasa de Renilla y luminómetro u otro instrumento capaz de monitorizar la luminiscencia, como los lectores de microplaca Thermo Scientific Luminoskan Ascent y Varioskan Flash.

Aplicaciones:
• Estudios de promotores para analizar los elementos reguladores cis y los factores de acción trans
• Cribaje de medicamentos
• Cribaje de ARNip y ARNmi
• Ensayos multiplex para estudiar efectos inespecíficos
• Ensayos de transmisión de ruta secretora/localización de proteínas
• Análisis de la vía de transducción de señal
• Estudios de empalme de ARN

La luciferasa de Renilla es una proteína de 36 kDa producida por un derivado del gen natural de luciferasa de Renilla del pensamiento del mar, Renilla reniformis. En comparación con la luciferasa natural, la Renilla verde es más estable en suero y tiene un espectro de emisión que deriva hacia el verde. La proteína proporciona una señal de flash extremadamente brillante que se descompone rápidamente. El reactivo del kit de ensayo de flash de Renilla Pierce optimiza esta señal para su uso en ensayos de indicadores de luciferasa de flash. El kit también es compatible con ensayos de flash con otras luciferasas de Renilla y derivados que utilizan coelenterazina como sustrato.

Más datos del producto
• Ensayos de luciferasa en células de Jurkat difíciles de transfeccionar
• Luciferasas versátiles: luminómetros de microplacas y ensayos de luciferasa de destello

Productos relacionados
Kit de ensayo doble de luciferasa de luciérnaga y de Renilla Pierce™

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
ensayoEnzima indicadora, ensayo de indicador de luciferasa
Células compatiblesCélulas de mamíferos
Método de detecciónBioluminiscente
Para utilizar con (equipo)Luminómetro (microplaca)
FormatoPlaca de 384 pocillos, placa de 96 pocillos
Tipo de etiquetaEnzima etiquetada
Línea de productosPierce
CantidadKit para 1000 reacciones
SustratoCoelenteracina
Propiedades de sustratoSustrato químico
Tipo de sustratoSustrato de luciferasa
ObjetivoLuciferasa, luciferasa Renilla verde
TécnicaQuimioluminiscencia mejorada
TipoKit de ensayo
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• Tampón de ensayo Flash Renilla, 50 ml, almacenar a 4 °C
• Coelenterazina (100X), 0,5 ml, almacenar a -80 °C
• Tampón de lisis celular 2X, 60 ml, almacenar a temperatura ambiente

Preguntas frecuentes

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


    • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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