Pierce™ Gaussia-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

El kit de ensayo doble de luciferasa de Gaussia y de luciérnaga de Thermo Scientific proporciona los reactivos necesarios para detectar simultáneamente la actividad de luciferasa intracelular de Gaussia y de luciferasa roja en lisados de células completas de mamíferos.

Características del kit de ensayo doble de luciferasa de Gaussia y de luciérnaga:

• Simultáneo: detección concurrente, basada en filtros, separada por longitud de onda de dos actividades de luciferasa
• Sensible: medida de las actividades de la luciferasa de Gaussia azul brillante y la luciferasa de luciérnaga roja en la misma muestra
• Rápido: no se requiere el paso de enfriamiento, a diferencia de los ensayos dobles secuenciales tradicionales
• Multiplex: capaz de cuantificar dos actividades celulares en la misma muestra

El kit de ensayo doble de luciferasa de luciérnaga y de Gaussia de Pierce es un ensayo altamente sensible que permite la detección simultánea de la actividad de luciferasa de Gaussia y de luciérnaga roja. La luciferasa de Gaussia actúa como indicador experimental con luciérnaga roja constitutivamente activa como control de normalización. Como se muestra en los siguientes vídeos de animación, esta combinación de indicador y control permite la monitorización simultánea de las actividades de luciferasa de indicador y control experimentales en un ensayo de lectura única sin necesidad de añadir dos pasos de reactivos de sustrato o de enfriamiento. La solución de trabajo del ensayo contiene sustratos para ambas luciferasas, y las reacciones se producen simultáneamente con la cinética de tipo flash. Las señales luminiscentes resultantes son resolubles espectralmente mediante filtros. En una sola muestra, los investigadores pueden analizar la actividad transcripcional de los elementos reguladores, las vías de transducción de señales y los efectos de los activadores o inhibidores.

Incluye:
tampón de lisis celular, tampón de reacción y sustratos coelenteracina y D-luciferina

Requiere:
indicadores de luciferasa de Gaussia y de luciérnaga roja; filtros en los intervalos de 425 a 525 nm para luciferasa de Gaussia y de 615 a 675 nm para luciferasa de luciérnaga roja. Luminómetro u otro instrumento capaz de controlar la luminiscencia, como los lectores de microplacas Luminoskan Ascent y Varioskan Flash y de Thermo Scientific; inyector necesario para evaluar más de 24 pocillos a la vez.

Aplicaciones:
• Estudiar dos elementos normativos al mismo tiempo
• Controlar dos vías de señalización simultáneamente
• Permitir el estudio de más de un blanco por pantalla (p. ej., efectos inespecíficos)

Vídeos de aplicación:
la luciferasa de Gaussia produce una señal bioluminiscente más brillante que las luciferasas de luciérnaga y de Renilla nativa. La señal bioluminiscente (λmáx. = 470 nm) producida por luciferasa de Gaussia es el resultado de la oxidación de coelenteracina. Esta reacción no requiere adenosina trifosfato (ATP) u otros cofactores. La luciferasa roja es una forma mutante de la luciferasa de luciérnaga japonesa de Luciola cruciata. Esta luciferasa produce un espectro de emisión de desplazamiento rojo (λmáx. = 613 nm) que resulta de la oxidación de D-luciferina en presencia de ATP. Las luciferasas de luciérnaga roja y de Gaussia se utilizan en el ensayo doble porque la salida de luz es resoluble espectralmente.

Más datos de producto
• Ensayos de indicador de luciferasa multiplex altamente sensible
• Detección de emisión doble simultánea de ensayos de indicador de luciferasa
• Activación de la vía de respuesta antioxidante por químicos pesticidas