Transcriptasa inversa SuperScript™ IV
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Transcriptasa inversa SuperScript™ IV

La transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ IV es una mutación del virus de la leucemia murina Moloney (M-MLV) patentada que presentaMás información
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La transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ IV es una mutación del virus de la leucemia murina Moloney (M-MLV) patentada que presenta una mayor resistencia y fiabilidad en reacciones de RT. Respecto a SuperScript™ III, ha mejorado ostensiblemente en resistencia al inhibidor, capacidad de procesamiento y velocidad de reacción, al tiempo que conserva todas las ventajas de la enzima anterior, incluido el aumento de la termoestabilidad, la síntesis de ADNc de longitud completa altamente eficaz y la reducción de la actividad de ARNasa. La RT SuperScript™ IV está diseñada para proporcionar una síntesis fiable, uniforme y rápida de ADNc en presencia de inhibidores que se encuentran en una gran variedad de muestras que provocan que otras RT disponibles actualmente resulten ineficaces.

La RT SuperScript™ IV es la mejor elección para todas las aplicaciones de transcripción inversa y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y qRT-PCR de la familia de productos SuperScript™. Se recomienda especialmente cuando la reproducibilidad y la fiabilidad son el principal objetivo y cuando los inhibidores de la muestra de ARN pueden interferir en la síntesis de ADN complementario, lo que provocaría sesgos en los estudios de expresión génica.

Entre las características de la transcriptasa inversa SuperScript™ IV se incluyen las siguientes:
• Resistencia significativamente mejorada a una gran variedad de inhibidores que pueden interferir con la síntesis de ADNc
• Síntesis sólida y específica de ADNc en una amplia gama de tipos de muestras
• Una reacción de transcriptasa inversa más rápida que reduce el tiempo de incubación de > 50 minutos a 10 minutos
• Significativamente mejor procesividad en comparación con la SuperScript™ III RT

Fuente
Purificada a partir de E. coli que expresa el gen pol de M-MLV, modificada para aumentar la termoestabilidad, la vida media, la procesividad, la resistencia a los inhibidores y para reducir la actividad de la ARNasa H.

Pruebas de rendimiento y calidad
Ensayos de endodeoxirribonucleasa, exodeoxirribonucleasa y ribonucleasa; y rendimiento y longitud del producto de ADNc.

Definición de la unidad
Una unidad de SuperScript™ IV RT es la cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmolo de desoxirribonucleótido en el material ácido precipitable en 10 minutos a 37 °C utilizando poli(A) oligo(dT)12-18 como plantilla/primer.

Condiciones de reacción unitarias
50 mm Tris-HCl (pH 8,3), 4 mm MgCl2, 10 mm DTT, 50 mm KCl, 0,5 mm dTTP, 0,4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0,4 mm poli(A) oligo (DT) 12-18 y enzima en 20 μl durante 10 minutos a 37 °C.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoStand-alone Enzyme
N.º de reacciones10 reacciones
Temperatura óptima de reacción50 °C
Cantidad2.000 unidades
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaSuperScript IV
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoHielo seco
Tamaño (producto final)Hasta 12,3 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Concentración200 U/μl
GC-Rich PCR PerformanceHigh
Velocidad de reacción10 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La RT SuperScript™ IV (2000 unidades totales a 200 U/μl), 10 μl
Tampón RT 5X, 1 ml
0,1 mM de DTT, 500 μl

Almacenar entre -5 y -30 °C.

Preguntas frecuentes

Can I use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase (Cat. No. 28025013, 28025021)? Can other reverse transcriptases, such as SuperScript reverse transcriptase, be used in the same way?

Yes, you can use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase.

We have not tested this for SuperScript reverse transcriptases, so we cannot guarantee it would also work with those products.

This article can be used as a reference for additional information.

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In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (Cat. No. 11756050). The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.

Can I get comparable cDNA yield and length using the SuperScript IV RT 10-minute protocol as when using the 50-minute protocol for SuperScript III RT?

When compared with SuperScript III RT (and other manufacturers’ RTs) in a synthesis reaction for a 9 kb cDNA, SuperScript IV RT performed successful synthesis in just 10 minutes and did so with comparable (or improved) yield (as shown by gel band density).

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