Immobilized Pepsin (Agarose Resin)

La agarosa de pepsina inmovilizada Thermo Scientific Pierce es una endopeptidasa ácida (pepsina) que se ha inmovilizado en resina de agarosa en gránulos para permitir la generación y purificación de fragmentos Fab y F(ab')2 a partir de anticuerpos.

La pepsina es una endopeptidasa ácida no específica producida en forma de precursor inactivo (pepsinógeno) en el revestimiento de la mucosa del estómago de los vertebrados. Hay varias pepsinas, cada una con un peso molecular de 35.000 y un pH óptimo de 1 a 3; con un pH >6, la enzima está inactivada permanentemente. La pepsina tiene una amplia especificidad de sustrato. Escinde las proteínas preferentemente en grupos carboxílicos de aminoácidos aromáticos como la fenilalanina, el triptófano y la tirosina. No se escinde en enlaces que contengan valina, alanina o glicina. La escisión en otros residuos se produce con una eficacia variable.

La pepsina y otras enzimas proteolíticas se utilizan en el análisis de laboratorio de varias proteínas. La pepsina y la papaína se utilizan a menudo para generar fragmentos de anticuerpos. La papaína se utiliza para escindir anticuerpos en fragmentos de Fab, que contienen un solo dominio de unión al antígeno. La pepsina se usa para generar fragmentos F(ab')2 eliminando solo esa porción del dominio Fc más allá de la región bisagra. Los fragmentos F(ab')2 obtenidos están compuestos por dos fragmentos Fab' de unión de anticuerpos conectados mediante disulfidos en la región bisagra.

La pepsina inmovilizada puede sustituirse por pepsina libre en cualquier aplicación y ofrece una serie de ventajas, como que prácticamente elimina la autolisis, elimina la contaminación de las muestras con la proteasa y permite controlar la digestión mediante la eliminación de la pepsina. La pepsina inmovilizada también es más estable contra la desnaturalización inducida por calor, lo que resulta en un mantenimiento más prolongado de la actividad. El kit de preparación F(ab')2 contiene pepsina inmovilizada, otros reactivos necesarios y un protocolo optimizado para la digestión de anticuerpos humanos, de conejo y de ratón.