Este kit de centrifugación NAb de proteína A/G Thermo Scientific es práctico para la purificación rápida por afinidad a pequeña escala de anticuerpos de diversos tipos de muestras. En cada kit se incluyen suficientes columnas de centrifugación NAb de proteína A/G, tubos de recogida, tampones y un protocolo optimizado para purificar al menos dos muestras de anticuerpos.

Características de la proteína A/G agarosa Pierce:

• Proteína A/G: la proteína de fusión recombinante inmovilizada de los dominios de unión de anticuerpos de las proteínas A y G permite la purificación de la IgG policlonal de casi cualquier especie de mamífero.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
•Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína A/G mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína A/G agarosa Pierce tiene una carga densa de proteína A/G inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión superior a 7 mg de IgG de humano por ml de resina.

La proteína A/G agarosa Pierce es una proteína A/G de fusión recombinante purificada inmovilizada covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). Esta variedad concreta de resina proporciona la combinación más versátil de funciones cromatográficas para aumentar el rendimiento y conseguir una purificación de alta pureza de la IgG completa procedente de muestras de suero de mamíferos. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

La proteína A/G es una proteína diseñada genéticamente que combina los dominios de unión a IgG de las proteínas A y G. La proteína de fusión se expresa en E. coli. La proteína A/G contiene cuatro dominios de unión de la Proteína A y dos de la Proteína G de la región Fc, lo que produce una masa final de 50.460 daltons (de 40 a 45 kDa por SDS-PAGE). La proteína A/G no es tan dependiente del pH como la proteína A sola; no obstante, tiene las propiedades aditivas de la proteína A y G.

La proteína A/G se une a todos los subtipos de IgG de humano, lo que la convierte en la opción idónea para purificar anticuerpos de IgG monoclonales y policlonales cuyo subtipo no se ha determinado. Además, se une a la IgA, la IgE, la IgM y (en menor medida) a la IgD. La proteína A/G también se une bien a todos los subtipos de IgG de ratón, pero no se une a la IgA, a la IgM o a la albúmina sérica de este animal. Por ello, la proteína A/G es una herramienta excelente para la purificación y detección de los anticuerpos monoclonales del ratón a partir de subtipos de IgG, sin que se produzcan interferencias de la IgA, la IgM y la albúmina sérica murina. Es posible que los subtipos individuales de anticuerpos monoclonales de ratón tengan una mayor afinidad con la proteína A/G quimérica que con las proteínas A o G.

La proteína A/G agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización del ligando. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína A/G inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

La proteína A/G agarosa Pierce se une a casi todos los isotipos y a casi todas las IgG de mamíferos procedentes de muestras de suero, líquido ascítico, sobrenadante de cultivo celular y otras muestras de anticuerpos, lo que permite una purificación efectiva de los anticuerpos. Ya que la proteína A/G inmovilizada combina los dominios de unión de inmunoglobulina de las proteínas A y G, la resina es eficaz en la purificación por afinidad de los anticuerpos de IgG de un gran número de especies de mamíferos huésped.

Propiedades de la agarosa en gránulos entrecruzada al 6 % (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: La presión manométrica indicada de un aparato de cromatografía líquida puede estar midiendo la presión total del sistema en lugar de la caída de presión en la columna).

Más datos del producto
• Uso de proteínas de unión de anticuerpos para la purificación de anticuerpos

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