La proteína L Plus agarosa Thermo Scientific Pierce es una resina de proteína L agarosa granulada de alta capacidad para su uso con diversos métodos de purificación de anticuerpos por afinidad.

Características de la proteína L Plus agarosa:

• Proteína L: la proteína L inmovilizada es ideal para la purificación selectiva de anticuerpos humanos y de ratón que tienen cadenas ligeras kappa.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína L mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Alta capacidad: esta variedad «Plus» de proteína L agarosa Pierce tiene una carga densa de proteína L inmovilizada, lo cual ofrece una capacidad de unión de 10 a 20 mg de IgG de humano por ml de resina.

La proteína L Plus agarosa Pierce es una resina de afinidad de alta capacidad para la purificación de isotipos de IgG de mamíferos que contienen cadenas ligeras kappa específicas. La proteína L es especialmente adecuada para aislar anticuerpos monoclonales VkI de IgG de ratón, así como VkI, VkIII y VkIV de IgG humana. La resina consiste en proteína L recombinante inmovilizada en agarosa granulada entrecruzada al 6% (CL-6B), mediante una química estable y resistente a la lixiviación. Los gránulos de agarosa se pueden regenerar y reutilizar varias veces si se almacenan correctamente.

La proteína L es una proteína de unión a la inmunoglobulina (36 kDa) que se derivó originalmente de la bacteria Peptostreptococcus magnus, pero que ahora se produce de forma recombinante en E. coli. La proteína L tiene la capacidad única de unirse a través de interacciones de la cadena ligera kappa sin interferir con el punto de unión al antígeno de un anticuerpo. De este modo, la proteína L se unirá a los miembros de todas las clases y subclases diferentes de inmunoglobulina (IgG, IgM, IgA, IgE e IgD) si tienen cadenas ligeras kappa. La proteína L también se une a fragmentos variables de cadena única (scFv) y fragmentos Fab. La proteína L se une a los tipos kappa I, III y IV en humanos y kappa tipo I en ratones. Además, la proteína L tiene un punto isoeléctrico (pI) de aproximadamente 4,5 a 4,8.

La proteína A Plus agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización de ligandos. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína L inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

Propiedades de la agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 de daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar (Nota: Es posible que la presión manométrica indicada en el aparato de cromatografía líquida se refiera a la presión total del sistema en lugar de a la caída de presión en la columna).

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