Pierce™ Far-Western Blot Kit for Biotinylated Proteins

El kit de inmunotransferencia Far Western Blot Pierce Thermo Scientific para proteínas biotiniladas permite la detección de inmunotransferencia Western blot en gel o en membrana de proteínas diana mediante la interacción con cualquier proteína de prueba con etiqueta de biotina utilizada como sonda principal.

Características del kit Far Western Blot para proteínas biotiniladas:

• Opción de detección en membrana o en gel: la detección en membrana ofrece una mayor sensibilidad; la detección en gel es más rápida y evita los problemas asociados con la transferencia incompleta o ineficiente
• Alternativa no radiactiva para los análisis Far Western: la química fiable y sensible de biotina/HRP-estreptavidina combinada con la detección de quimioluminiscentes ofrece una alternativa práctica y segura al proceso de radioetiquetado de la proteína de cebo
• Intervalo de interaccón útil: efectivo para pares de interacción que tienen asociaciones de unión entre la presa y el biotinilado proteína de cebo moderadas o fuertes
• Detección sin anticuerpos primarios: utiliza una proteína biotinilada como sonda, eliminando la necesidad de anticuerpos primarios o incluso de tener conocimiento previo de las identidades de proteínas objetivo
• Compatible con geles SDS-PAGE y nativos: ofrece opciones para sondear las proteínas presa en un entorno más nativo, ya que los sistemas reducidos o desnaturalizados no siempre permiten la interacción que se pretende conseguir
• Uniones no específicas reducidas: los sistemas de biotina/HRP-estreptavidina de unión inespecífica reducida demuestran una unión menos inespecífica comparada a los anticuerpos dirigidos contra la proteína de cebo
• Compatible con tinción de proteínas: los geles se pueden utilizar para la tinción total de proteínas tras el paso de detección de quimioluminiscentes en gel, lo que elimina la necesidad de utilizar dos geles

Este kit de inmunotransferencia Far Western Blotting proporciona los reactivos y el protocolo necesarios para sondear las proteínas objetivo en función de su interacción con un socio de unión específico, que el investigador suministra en forma purificada y biotinilada. El kit es exitoso para el análisis de interacciones proteína-proteína en las que las proteínas objetivo (presa) pueden ser enlazadas tras haber sido separadas por electroforesis en gel. El kit incluye reactivos y procedimientos para la detección de sondas y quimioluminiscentes con blots o directamente de minigeles.

Incluye:
• Conjugado de HRP-estreptavidina, tampones de dilución y lavado, soluciones de sustrato quimioluminiscente y láminas de celofán para minigeles

Aplicaciones:
• Descubrimiento de interacciones de proteínas: busque y seleccione proteínas en lisados celulares que tienen afinidad de unión a la proteína biotinilada purificada
• Confirmación de interacción de proteínas: caracterice e identifique la presencia de interacciones de unión nativas o fuera del objetivo que implican una determinada proteína biotinilada y muestras particulares

Far Western blotting implica empezar a sondear los objetivos con una proteína de interacción putativa en lugar de un anticuerpo primario. El método se llama Far Western blotting porque los anticuerpos primarios se utilizan de forma secundaria para detectar la sonda de interacción primaria en lugar de la proteína diana. El kit de inmunotransferencia Western blot Pierce para proteínas biotiniladas elimina por completo el uso de anticuerpos. La sonda primaria (es decir, la proteína de cebo biotinilada suministrada por el investigador) se detecta de forma secundaria con un conjugado de HRP-estreptavidina cuya actividad se visualiza por reacción con un sustrato quimioluminiscente muy sensible.