HisPur™ Ni-NTA Superflow Agarose

Thermo Scientific HisPur Ni-NTA Superflow Agarose es un soporte Superflow 6 modificado con ácido nitriloacético (NTA) cargado con níquel divalente (Ni⁺²), diseñado para la purificación por FPLC de proteínas etiquetadas con polihistidina.

Características de HisPur Ni-NTA Superflow Agarose:

• Alta capacidad: unión superior a 20 mg de GFP etiquetada con HIS por ml de resina a un flujo lineal de 300 cm/hora
• Alta pureza: proporciona una pureza superior al 80 % de las fracciones eluidas cuando se usa para purificación a partir de lisados
• Versátil: puede usarse para purificar proteínas en condiciones nativas y desnaturalizantes
• Sólido: las microesferas altamente entrecruzadas toleran flujos lineales de hasta 1200 cm/hora
• Compatible: mantiene la función en una amplia variedad de condiciones químicas y de pH
• Rentable: la resina de precio competitivo es estable a lo largo de múltiples ciclos de limpieza y reutilización

HisPur Ni-NTA Superflow Agarose es una resina duradera altamente entrecruzada que no se comprime a los flujos utilizados para las purificaciones por FPLC a media o gran escala. La resina aguanta bien diversos productos químicos y valores de pH, y es compatible con los procedimientos más frecuentes de limpieza in situ. En comparación con cobalto y otros ligandos utilizados para la cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados (IMAC), el níquel proporciona una mayor capacidad para la purificación de proteínas etiquetadas con His. HisPur Ni-NTA Superflow Agarose muestra una alta capacidad de unión dinámica a través de un intervalo de flujos, lo que la convierte en una elección excelente para purificaciones a mayor escala.

Aplicaciones:
• Purificación en FPLC de gran a media escala de proteínas etiquetadas con polihistidina

La cromatografía de afinidad se utiliza a menudo como una estrategia rápida y fácil para la purificación de proteínas recombinantes. Uno de estos métodos de purificación implica la unión de una etiqueta de polihistidina a un catión metálico divalente que se ha coordinado mediante un quelante inmovilizado con un soporte de microesferas. Para la purificación por cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados (IMAC) de proteínas etiquetadas con His, el tipo de microesfera, el quelante, y el metal inmovilizado influyen sobre la pureza, el rendimiento y el funcionamiento del flujo de estas purificaciones.

HisPur Ni-NTA Superflow Agarose es un soporte Superflow 6 modificado con ácido nitrilotriacético (NTA) cargado con níquel divalente (Ni+2) diseñado para la purificación por FPLC de proteínas etiquetadas con poli-histidina. Para demostrar el rendimiento, se sobreexpresó 6 x His-GFP en un reactor de 100 l y la masa celular se recogió en múltiples fracciones. Se lisó una porción de la biomasa (240 g) con 2 l de tampón de lisis suplementado con Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor (n.º ref. 78439). El lisado se aclaró y se dividió en dos fracciones. A continuación, la proteína diana se purificó usando HisPur Ni-NTA Superflow Agarose y una resina de la competencia en columnas equivalente de microesferas empaquetadas de 200 ml. El rendimiento total, la recuperación y la pureza (>80 %) eran prácticamente idénticas para ambas resinas y se purificaron más de 4 gramos de proteína diana en menos de 3 horas.

Más datos del producto
• Caracterización del rendimiento de HisPur Ni-NTA Superflow Agarose

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