Kit de co-inmunoprecipitación Pierce™

El kit de coinmunoprecipitación Thermo Scientific Pierce proporciona una inmovilización covalente de anticuerpos, así como todos los componentes necesarios para realizar un experimento de coinmunoprecipitación (co-IP) con control adecuado y sin interferencias de anticuerpos en el producto final.

La co-IP es un enfoque común para el estudio de las interacciones proteicas que utiliza un anticuerpo para inmunoprecipitar el antígeno (proteína cebo) y coinmunoprecipitar cualquier proteína de interacción (proteínas presa). Los métodos de Co-IP tradicionales que utilizan una proteína A o G producen una coelución de las cadenas ligeras y pesadas del anticuerpo que pueden comigrar con las bandas relevantes, lo que enmascararía unos resultados importantes. El kit de Co-IP Pierce resuelve este problema mediante el acoplamiento covalente de anticuerpos en una resina reactiva a aminas. El kit incluye tampones optimizados para la unión y recuperación de proteínas, reactivos para realizar experimentos de control y eficaces columnas de centrifugado y tubos de recogida, que acortan el protocolo y minimizan el manejo y la mezcla de componentes.

Características del kit de coinmunoprecipitación:

• Funciona con cualquier anticuerpo purificado: realice experimentos de co-IP con cualquier anticuerpo purificado con independencia de la especie o el tipo de inmunoglobulina (Ig) (IgY de pollo, IgE humana, IgG1 de ratón, IgM, etc.); sin dependencia de la unión de afinidad de proteína A y proteína G
• Sin interferencias de anticuerpos: el método de unión covalente y el sistema de elución sin reducción crean productos de co-IP puros sin contaminación por parte del anticuerpo de inmunoprecipitación (IP)
• Gránulos de anticuerpos reutilizables: la inmovilización covalente de anticuerpos permite que la resina de IP preparada se reutilice, lo que ahorra anticuerpos costosos.
• Kit completo: todos los reactivos para la inmovilización de anticuerpos y muchos experimentos de IP, incluidos tampones de lavado y de unión, un tampón de elución y prácticas columnas de centrifugación para microcentrífugas, lo que permite que la manipulación de la resina sea más sencilla y eficaz.
• Gránulos de control incluidos: se suministran gránulos de agarosa no derivatizados para el uso como control negativo para la vinculación inespecífica.
• Versátil: el método de co-IP es compatible con cualquier tampón de muestras de proteínas fisiológico (no desnaturalizante) que, a su vez, es compatible con el complejo de interacción de proteínas y anticuerpo-antígeno específico

La coinmunoprecipitación (co-IP) es un método in vitro popular para descubrir las interacciones proteicas. El kit de coinmunoprecipitación Pierce se ha configurado para proporcionar las herramientas esenciales para realizar experimentos de co-IP de forma que creen productos de IP y co-IP puros sin anticuerpos de IP problemáticos. Esta mejora de la técnica de co-IP tradicional se ha conseguido al sustituir los gránulos de agarosa con proteína A/G por la resina AminoLink Plus con la que los anticuerpos de IP puros se pueden conjugar de forma directa y permanente. El tampón de elución suave (no desnaturalizante ni reductor) permite la disasociación de las dianas de IP y retiene el anticuerpo inmovilizado en los gránulos de agarosa. El resultado es un producto puro que puede ser analizado por Western Blot, o incluso secuenciado, sin interferencia del anticuerpo.

Además de eliminar la contaminación por anticuerpos de IP, el método de conjugación de anticuerpos que forma parte del kit de Co-IP Pierce evita las interacciones de unión inespecíficas y la contaminación por infiltración que puede resultar de los métodos tradicionales de proteína A y proteína G. Aunque el método de conjugación requiere que el anticuerpo de partida se encuentre en un tampón libre de aminas sin seroalbúmina bovina (BSA), gelatina ni otros estabilizantes de proteínas de almacenamiento, el hecho de que no dependa de las proteína A y G supone que se puede utilizar cualquier clase o especie de anticuerpos para la IP (por ejemplo, IgM e IgY de pollo). De hecho, cualquier proteína purificada se puede inmovilizar para su uso en la purificación por afinidad de los elementos de unión.