Pierce™ Iodination Reagent (1,3,4,6-tetrachloro-3α,6α-diphenyl-glycoluril)

El reactivo de yodación Thermo Scientific Pierce es 1,3,4,6-tetracloro-3a,6a-difenil-glicoluril, un agente oxidante que activa eficazmente el yodo para su incorporación espontánea en los grupos de proteínas tirosilo.

Características del reactivo de yodación:

• Extremadamente estable y virtualmente insoluble en agua (Fraker y Smith, 1978)
• La solubilidad en cloroformo permite la «siembra en placas» de las alícuotas del reactivo en las paredes de los recipientes de vidrio o de yodación plástica. Los recipientes en placas pueden prepararse con antelación y almacenarse en un desecador
• Permite la yodación rápida de proteínas en una mezcla de reacción acuosa que contiene Na¹²⁵I radiactivo
• Las reacciones adversas son insignificantes
• No se requiere ningún reactivo reductor porque las reacciones se terminan al decantar la solución de reacción del reactivo de yodación en la placa IODO-GEN
• Se consiguen unas actividades específicas de 1 x 10⁵ cpm de ¹²⁵ I por microgramo de proteína y una eficacia de etiquetado del 60 %
• Se puede utilizar para yodar grupos fenólicos en entrecruzadores u otros reactivos de modificación de proteínas antes o después de que una proteína, péptido o superficie celular se reaccione con el reactivo de modificación
• Se pueden yodar pequeñas cantidades de proteínas (Tolan, et al., 1980)
• Más eficiente que la cloramina-T o lactoperoxidasa (Salacinski, 1981)
• Los grupos fenólicos en reactivos de entrecruzamiento (consulte la lista de reactivos compatibles)

A diferencia de la cloramina-T, el reactivo de yodación Pierce se puede revestir en material de vidrio para permitir la activación oxidativa en fase sólida y el etiquetado con yodo. Como resultado, los agentes reductores no son necesarios en el procedimiento.

Aplicaciones:
• Recomendado para su uso con yodo-¹²⁵ (Millar y Smith, 1983)
• Sustituye eficazmente el altamente tóxico TlCl₃ para la yodación de ácido nucleico (Piatyszek, et al. 1988)
• Extraer oxidativamente los grupos sulfhidrilo de la solución antes del ensayo de proteínas (McClard, 1981)

La yodación consiste en la introducción de yodo radiactivo (I-125 o I-131) en ciertos aminoácidos (generalmente tirosinas) en proteínas y péptidos. La yodación se lleva a cabo en las posiciones orto al grupo hidroxilo en tirosina; puede producirse monosustitución o disustitución. Cuando los lugares yodables, como los tirosinos, están ausentes o tienen una accesibilidad limitada en una proteína, los sitios fenólicos yodables pueden ser introducidos usando los reactivos Bolton-Hunter (SHPP y Sulfo-SHPP). Algunos entrecruzadores también contienen grupos tirosilo yodables en sus agentes separadores.

125-i o 131-i radiactivos se pueden incorporar en las proteínas por oxidación enzimática o química. En el método de oxidación química, el yoduro de sodio se convierte a su correspondiente forma de yodo reactivo, que luego se incorpora espontáneamente en grupos tirosilo. Aunque son necesarios para la activación del yodo, los reactivos oxidantes son potencialmente dañinos para las proteínas. El reactivo de yodación Pierce (anteriormente conocido como reactivo IODO-GEN) es más suave que la cloramina-T, pero igualmente eficaz para la activación de yodo. El uso del reactivo en un procedimiento de fase sólida hace que la yodación sea aún más suave en las proteínas.